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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 质粒DNA提取
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15910933225

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒DNA提取

用质粒DNA提取试剂盒，提取质粒DNA后用Nanodrop检测DNA浓度时发现不纯，杂质太多怎么办？

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1楼 2017-02-12 20:38:49
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fenleixue

至尊木虫 (小有名气)
nanodrop有时候不准，特别是用试剂盒提取的DNA，你可以跑个琼脂糖电泳看看有没有弥散的条带

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2楼2017-02-12 20:47:25
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15910933225

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fenleixue at 2017-02-12 20:47:25
nanodrop有时候不准，特别是用试剂盒提取的DNA，你可以跑个琼脂糖电泳看看有没有弥散的条带

跑电泳挺好的，但是我要准确知道DNA的浓度，用什么方法呢？

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3楼2017-02-12 20:49:40
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fenleixue

至尊木虫 (小有名气)
如果确实杂质太多，那么换试剂盒，要么留意自己的提取手法，比如离心后吸取裂解上清的时候尽量避免吸到裂解的白色细胞内含物，还有看看裂解液有没有白色沉淀，如果有需要温浴溶解掉沉淀再用（具体看用的哪家的盒子）

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4楼2017-02-12 20:50:28
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fenleixue

至尊木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 15910933225 at 2017-02-12 20:49:40
跑电泳挺好的，但是我要准确知道DNA的浓度，用什么方法呢？
...

据说用Qubit dsDNA HS kit会比较准，但我没用过。还有个不准确的方法是拿你的样品和marker比较亮度，大概能估算一下。

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5楼2017-02-12 20:56:01
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
纯度不行是老问题，微提很难得到纯度高了，大提一般都不错maxi-prep

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
6楼2017-02-13 05:12:41
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