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wyong186

木虫 (正式写手)

[交流] 金币求助DNA分离提纯,麻烦斑竹发金币,谢谢!

请教大家一个问题, 我的实验过程:①总DNA提取 →PCR →DNA提纯分离 →目的DNA片段; 然后为了获得浓度较大的DNA② 以目的DNA片段为模板进行PCR,检测时为什么会出现拖尾?

[ Last edited by wyong186 on 2008-12-17 at 08:57 ]
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

smear 的原因:1,胶 梳子拔得太早过晚,上样空不平;2,上样、电泳buffer变质,且越跑越模糊3,PCR产物本身:非特异条带太多,酶量太大,循环数太多,模板质量不好,有蛋白等污染,镁离子过多4,PCR本身就是SMEAR,如mRNA
帮助虫友,提升自己
5楼2008-12-17 10:15:58
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

可以适当提高温度
2楼2008-12-16 23:01:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

PCR的模板量太大
提高退火温度
3楼2008-12-17 08:37:57
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