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synhily木虫 (正式写手)
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[交流]
引物上加了一段同源臂后自连了，怎么办？
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设计好的引物前加了一段儿另外一个基因的同源臂后，自连了，怎么办？ 各位虫虫有没有知道什么网站可以查出同源臂自连的？ 谢谢！ 打个比方： 我的引物为：上游：5-ATCGATCGATCGATCG-3 下游：5-TCGATCGATCGATCGA-3 但是由于实验的需要需要在上游引物和下游引物的前面加上一段同源臂，而同源臂是这个基因序列的一部分例如：AAAAAAAAAATTTTTTTTTTTCCCCCCCCCCCGGGGGGGGGGGAAAAAAAAAAAAAATTTTTTTTTTCCCCCCCCCCCGGGGGGGGGGAAAAAAAAAAAATTTTTTTTTTTTCCCCCCCCCCCCGGGGGGGGGGGGGG 我由于不知道怎样避免同源臂的自连，碰巧上游引物的前边加了AAAAAAAAAAA，下游的前边加了TTTTTTTTTTT（这是根据我的实验结果推测出同源臂自连上了，但是我不知道怎么查出它们是否自连） 结果变为：上游5-AAAAAAAAAAAATCGATCGATCGATCG-3 下游5-TTTTTTTTTTTTCGATCGATCGATCGA-3 这样的话，PCR总是引物自连，导致我要的结果被掩盖！虫虫们，有知道怎么查同源臂自连的方法吗？ PS:在primer5上已经查过，看不出来！据说是一个外国的网站上可以查，但是我找不到！ |
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