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Nigori

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[交流] HPV病毒DNA提取流程已有3人参与

异丙醇

1. DNA不溶于异丙醇，加入异丙醇减少DNA溶解度，使得DNA析出。使得dna 和少量蛋白质析出产生白色絮状沉淀。降低分子运动，易于形成沉淀。静置时间越长DNA得率越高。溶液一成分：SNETSDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离

NACL 调节盐离子浓度

EDTA 螯合金属离子，抑制DNA酶

Tris盐酸酸碱平衡

  溶液二：异丙醇溶液三：灭菌注射用水。（为什么在整个DNA提取过程中沉淀DNA需要冰冷的异丙醇或者乙醇？常温的有什么样的影响？因为低温可以促进DNA的沉淀，在DNA量很少的情况（比如你的实验）可以提高抽提效率。不过如果DNA量较多时，常温也没问题）

注意事项：

1，样本离心后粘液，杂质多，用枪吸出部分溶液，尽量上清去干净。

2，  样本中血液，杂质较多时用细胞保存液，PBS，灭菌注射用水蒸馏水，清洗一遍。

3，  煮沸时切勿让管盖爆开，加热裂解的时间可适当延长到20分钟。

4，  加热后，样本离心10分钟为佳。

5，  加模板时，尽量将枪头保持在液面靠上的位置。

6，  血液，杂质较多样本加样前可按5-10倍比例稀释模板，在进行扩增。

一步法提取DNA:

特殊样本用细胞保存液清洗一遍

1,提取500UL样本（可适量减少）

2. 14000RPM 离心7分钟，去上清

3.加入50UL 裂解液震荡混匀

4.加热17分钟

5.14000RPM离心7分钟

6.特殊样本，模板稀释5-10倍，再加样

扩增试剂

1，  建议按人份混合酶和MIX混合液，剩余分开保存。如混合好的试剂勿反复冻融，防止酶失活。

2，  pcr管有无问题，保存适当

3，  扩增仪升降温有无问题，各孔间温差，扩增程序。

杂交

1，  变性时间，冰水温度，PCR管内产物有无挥发，管底产物要浸入冰水至少2分钟。

2，  杂交时间适当延长到15min

3，  加样用枪吹打几次，使模板与杂交液混匀。

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