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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合PCR引物的设计
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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可以先分别构建a和b的重组载体，然后以此为模板进行

发自小木虫Android客户端
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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
11楼2017-01-24 05:41:30
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马敏马

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yt7777 at 2017-01-20 04:11:46
设计四条引物，分别是 geneA和geneB的上下游引物，A的上游引物和B的下游引物正常设计即可，A的下有引物和B的上游引物需要包含linker序列（可以不全部包括在内，但是两条引物需要有重叠部分），然后先用引物扩增A和B ...

我想请问，A的下游引物和B的 上游引物包含linker序列，那他的Tm值如何要求？是不是只看A的上游和B的下游部分，不用包括后面linker的部分。我现在在设计该部分引物，不知道该怎么做
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12楼2017-05-22 18:04:47
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莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

linker可以在设计引物的时候放在A基因reverse引物的后面，再加上10个左右的B基因；B也同理。
这样同源序列就有将近40bp；做一个退火融合，应该没问题。
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13楼2017-05-23 14:07:56
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meetogo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yt7777 at 2017-01-20 04:11:46
设计四条引物，分别是 geneA和geneB的上下游引物，A的上游引物和B的下游引物正常设计即可，A的下有引物和B的上游引物需要包含linker序列（可以不全部包括在内，但是两条引物需要有重叠部分），然后先用引物扩增A和B ...

请教一下，A的下游引物要比上游引物长很多，这样的话Tm差异就会很大，请问这是个大问题吗？或者我们需要把A的上游引物设计的长一些？
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14楼2018-06-02 08:34:58
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