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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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可以先分别构建a和b的重组载体,然后以此为模板进行

发自小木虫Android客户端
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
11楼2017-01-24 05:41:30
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马敏马

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yt7777 at 2017-01-20 04:11:46
设计四条引物,分别是 geneA和geneB的上下游引物,A的上游引物和B的下游引物正常设计即可,A的下有引物和B的上游引物需要包含linker序列(可以不全部包括在内,但是两条引物需要有重叠部分),然后先用引物扩增A和B ...

我想请问,A的下游引物和B的 上游引物包含linker序列,那他的Tm值如何要求?是不是只看A的上游和B的下游部分,不用包括后面linker的部分。我现在在设计该部分引物,不知道该怎么做
12楼2017-05-22 18:04:47
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莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

linker可以在设计引物的时候放在A基因reverse引物的后面,再加上10个左右的B基因;B也同理。
这样同源序列就有将近40bp;做一个退火融合,应该没问题。
13楼2017-05-23 14:07:56
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meetogo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yt7777 at 2017-01-20 04:11:46
设计四条引物,分别是 geneA和geneB的上下游引物,A的上游引物和B的下游引物正常设计即可,A的下有引物和B的上游引物需要包含linker序列(可以不全部包括在内,但是两条引物需要有重叠部分),然后先用引物扩增A和B ...

请教一下,A的下游引物要比上游引物长很多,这样的话Tm差异就会很大,请问这是个大问题吗?或者我们需要把A的上游引物设计的长一些?
14楼2018-06-02 08:34:58
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