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laimin15

无虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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[交流] 【求助】如何观察细胞在材料上的生长情况

朋友们：我做的是细胞在厚度为2毫米的钛片上的生长情况，材料不透光想问一下大家如何观察细胞在材料上的形态？
1、用扫描电镜的话，如何固定细胞?有什么注意的细节？扫描电镜比较贵，我想一次成功，所以请做过的同学，给点建议！
2、用激光共聚焦的话可以嘛？
谢谢！

[ Last edited by zhangwj on 2008-12-14 at 11:16 ]

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1楼2008-12-14 08:57:29

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dj04164

木虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
贵宾: 0.1
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红花: 7
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虫号: 687713
注册: 2009-01-04
专业: 生物医用高分子材料

★ ★ ★ ★
yusen_1982(金币+2,VIP+0):谢谢应助，欢迎常来生物材料版
zhangwj(金币+2,VIP+0):新虫加倍给！

这个要考虑你想看什么细胞器了，一般来说，如果只想看看细胞的伸展状态。可以按照如下操作：
细胞养好后，甲醇/醋酸 9：1固定20min，拿出来风干。丫（口字旁的，输入法打不出来）啶橙 0.01%水溶液染色4min。荧光显微镜488nm观察，可以看到细胞质呈红色，细胞核为黄绿色。如果看到的细胞全是红色，就直接用水冲，几分钟之后就行了。时间长了染料会退色。可以重新染了再去看。荧光显微镜的入射光与出射光是在同一方向的，所以不管片子是不是透明都可以看得到。普通光学显微镜一般都是投射的，有些是反射的，但细胞基本上都是透明的，不染色观察的效果不太好。
如果觉得还不是很爽，用4%多聚甲醛固定，DAPI或hoechst染核，再找个染料染细胞质，或是细胞骨架（最好带FITC，比如鬼笔环肽-FITC），这样先用ＵＶ拍一张，再用４８８拍一张两张一合