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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr空白对照老是出现两条带，怎么回事？
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rhapsody007

金虫 (小有名气)
什么样的样本能提出这么小的DNA，确实这提的是DNA么
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吉恩特磁珠
11楼2017-01-11 14:45:13
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by rhapsody007 at 2017-01-11 14:45:13
什么样的样本能提出这么小的DNA，确实这提的是DNA么

猪肝浸膏，猪肝提取液，是经过加工的，核酸应该被破坏比较严重，大部分断裂了，我用试剂盒提取的，刚开始提取的没有任何条带，改了一些步骤才提取出这么点很小的条带

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12楼2017-01-11 14:49:11
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415881168


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13楼2017-01-11 14:51:17
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lxf921227

金虫 (小有名气)
减少引物用量  然后做个梯度PCR确定最适的退火温度

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14楼2017-01-11 15:12:39
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像鱼一样飞吧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，我曾经也是遇到过这样的情况，也是153bp的条带，空白对照老是出现跟正常条带一样的条带产物。起初我以为是我操作的不规范造成的，但是事实上我请师兄师姐做也是这样的情况，然后我问老师他放大之后给我看我的条带是不是在一条直线上，放大之后发现果然不在一条直线上，所以我老师我做的没有问题。我表面上同意了他的观点，但是我一直在找原因，如果您解决了这个问题，可以跟我交流一下么？先谢谢您！另外，因为我们的片段很小，如果您和我一样用的是ex-tag酶的话，我建议您有条件的话可以用高保真pfu酶试验一下，因为据说ex-taq酶容易发生突变，具体我也不太清楚了，我的老师也不让我跟进这个试验了！
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15楼2017-01-12 10:57:25
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18270879372

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by guishuai_tj at 2017-01-11 12:53:20
引物二聚体怎么会是两条

...

第二条带不清楚 这个应该是降解了  我也觉得可能是引物二聚体。。是样品里的核酸的可能性比较小 个人意见哈 如有不对还请谅解。。。。
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16楼2017-01-12 14:58:20
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夏冰莲

新虫 (小有名气)
我感觉你DNA 都没有提出来DNA 差不多都kb ，你DNA 电泳图显示左边Maker吗DNA 怎么会100？你还是摸索摸索怎么提DNA 吧！

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17楼2017-01-12 23:17:49
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jianglin0116

新虫 (初入文坛)
dna电泳图条带弥散，是不是dna降解了啊

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18楼2017-01-13 13:00:58
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iayala

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
非特异扩增吧。如果条带大小跟目的条带差距很大，不用理吧，请示下老板，别投进太多精力。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

guishuai_tj
19楼2017-01-13 16:12:24
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by iayala at 2017-01-13 16:12:24
非特异扩增吧。如果条带大小跟目的条带差距很大，不用理吧，请示下老板，别投进太多精力。

这种情况下如果我的样品扩增出了目的条带，同时也有引物二聚体和非特异性条带，这种结果是不是也可以作为合格的检测结果，还是需要再改进重新p

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20楼2017-01-13 18:07:43
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