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徐国栋

新虫 (小有名气)

[求助] 液相跑20种氨基酸

用岛津的20AD工作站跑20种氨基酸,衍生剂为DNFB:
1.丝氨酸跑不出来。
2.其余19种单品都可以解析出来且线性较好。
3.谷氨酸和谷氨酰胺保留时间相差较大,和单品的保留时间差相差过大,怀疑谷氨酸线没有跑出来。
4.组氨酸和苯丙氨酸只有一个峰。

混标是用水溶解的,是不是在这个pH条件下某些类氨基酸会互相作用,还发现混标里的峰很多都明显比单品峰小很多,是反应不完全还是怎样。可是衍生剂峰还是比较大的,说明够用,有虫友可以一起讨论下吗,万分感谢
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徐国栋

新虫 (小有名气)

送红花一朵
谢谢您的回复。我不太理解您说的反应得率,这个如何获知?条件严格控制方面,操作平行性和操作时间控制的应该没有问题。一共两到三个样品,操作时间差可以忽略不计,使用的仪器都是相同的,条件方面应该较为严格
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4楼2017-01-10 09:35:50
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柳絮虫

新虫 (职业作家)

柱前衍生,应该考虑反应得率,条件需要严格控制
2楼2017-01-09 18:30:16
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徐国栋

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 柳絮虫 at 2017-01-09 18:30:16
柱前衍生,应该考虑反应得率,条件需要严格控制

20种氨基酸单品进行跑样没有问题,线性可达3个9,混标跑样峰面积对不上,实在不好判断。你提到的反应得率和严格控制条件是什么意思呢?我当时就跑了三个样品,操作时间很短,应该没什么问题,至于设备也没有出问题,而且单标每种5个梯度,这么多做起来准备时间比这次长多了线性也挺好,这一次一共是19种氨基酸的峰出来后很难判断谁是谁?
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3楼2017-01-10 09:15:38
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柳絮虫

新虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 徐国栋 at 2017-01-10 09:15:38
20种氨基酸单品进行跑样没有问题,线性可达3个9,混标跑样峰面积对不上,实在不好判断。你提到的反应得率和严格控制条件是什么意思呢?我当时就跑了三个样品,操作时间很短,应该没什么问题,至于设备也没有出问题 ...

氨基酸与试剂反应条件不同,必然导致反应得率不同。即使是标准品(单样)也会出现不同的线性方程。所谓条件控制,就是在同一条件下,类似数量的样品在类似的反应得率下才能获得定量依据。

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5楼2017-01-10 11:28:11
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