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[求助]
求助涂布法计数细菌cfu的问题 已有1人参与
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我是研一的学生，最近在培养大肠杆菌，在稀释的过程中操作出了问题，导致板子长菌的个数有问题，具体操作如下:LB培养基培养1比1000大肠杆菌12小时，接着相同培养基1比100培养4小时后取菌液100微升，分别1倍，2倍，4倍，8倍，10倍，16倍稀释，稀释完毕之后再逐级稀释6次(稀释10的6次方)涂版在10公分的培养基上。培养12小时数板子的点根据稀释倍数来计算cfu。我遇到的问题是:1，板子涂不匀，2，点长的十分密集，3稀释倍数大的点数反而比稀释倍数小的多。 特再次发求助帖希望各位师长能给我解惑。我自己总结是我涂版操作不熟练导致没法涂匀，但是我不知道该如何解决，一直在练手但是感觉效果不明显。但是剩下两个问题不知道原因，我想了解下涂版法的具体操作，因为和我网上查的不太一样，提前在此谢过了 发自小木虫Android客户端 |
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给我的感觉就是菌液没有混匀，导致你稀释的时候菌液浓度不均。菌落密集肯定就是你涂布操作的问题了，你不要来回涂布太多次，这样反而使菌分布不均了，另外最好一个浓度涂两个到三个培养皿，这样也方便你比较，希望对你有帮助 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2017-01-05 14:05:48
2楼2017-01-05 11:36:59
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非常感谢您的指导！不能来回涂是么，这一点我记住了。还有就是我稀释的时候是用移液枪取100微升菌液打到装有900微升蒸馏水的1毫升离心管中，反复吹打，这样逐级稀释6次，期间要注意什么呢？感觉我吹打了很多次了，但是菌液还是没有混匀。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-01-05 14:53:41
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从原始浓度往下稀释时，前几个梯度，你可以扩大稀释倍数，因为前几个你肯定是无法计数的，关键在于你后面浓度的稀释，稀释倍数可以稍微调整得少一点，也可以适当增加几个浓度。菌液接入培养皿肯定是要用涂布棒来回涂的，但是不能重复这个动作太多次，这样反而不利于均匀涂布。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-01-05 15:34:01
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