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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 核酸检测老是污染
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立早

新虫 (小有名气)

[求助] 核酸检测老是污染 已有1人参与

做病原核酸pcr检测，因为产物要上试纸条。最近老是污染，是因为环境中有气融胶，还是因为有核酸胶上看不到的引物二聚体。每次上试纸条时都有假阳性。但是第一次做时结果很好，没有假阳性出现。有没有懂的人指点一二。

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-01-03 10:39:46
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你所说的什么上试纸条有假阳性，这个我倒是没有做过。从pcr的角度看，气溶胶的问题其实是可以避免的。pcr下机后，样品可以放在-20℃放个一分钟，就可以在一定程度上避免出现气溶胶。至于引物二聚体的出现，大致有两方面的原因。一方面是引物有问题，会出现较多的气溶胶，另一方面就是如果你的引物加多了也会出现。希望能对你有所帮助。
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2楼2017-01-03 15:22:04
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立早

新虫 (小有名气)
好的，谢谢老师。我试一下。

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3楼2017-01-03 21:06:54
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立早

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-03 15:22:04
你所说的什么上试纸条有假阳性，这个我倒是没有做过。从pcr的角度看，气溶胶的问题其实是可以避免的。pcr下机后，样品可以放在-20℃放个一分钟，就可以在一定程度上避免出现气溶胶。至于引物二聚体的出现，大致有两 ...

谢谢老师。

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4楼2017-01-03 21:12:46
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win2525

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 立早 at 2017-01-03 21:12:46
谢谢老师。
...

我也遇到过这个问题，先看看是不是试剂污染，如果不是，那就看看是不是场地污染，多通风。或者用LemnisCare 的PCR Cleaner清除一下。我是这样解决了。后来把超净台清理了一下，问题解决了。
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诸葛奇燕
5楼2018-09-29 13:59:36
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