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membraneliu

铁虫 (正式写手)

[求助] CRISPR-Cas9体系可以在细胞外对DNA进行剪切编辑吗? 已有2人参与

本人不是学生物的,但是对CRISPR-Cas9这个东西很感兴趣,但是又不太了解。有几个疑问想请教论坛里的大神
(1)我想知道,在细胞外,比如普通的PBS溶液里面有游离的DNA,往其中加入CRISPR-Cas9体系能不能对溶液中的DNA进行编辑呢?
(2)CRISPR-Cas9对DNA进行编辑可不可以只停留在剪切这一步,就是只把DNA切断但并不发生后续的替换之类的反应?怎么控制反应在切断后就停止呢?
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草溪河

铁虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-03 07:46:17
剪断DNA后的连接和替换是由细胞内的DNA修复系统完成的,包括同源重组修复和非同源末端修复

发自小木虫Android客户端
2楼2017-01-03 00:47:08
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匿名

本帖仅楼主可见
3楼2017-01-03 01:33:30
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tiffany123

木虫 (著名写手)

额尔古纳河右岸的露珠。
4楼2017-01-03 02:11:45
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allegory

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2017-01-03 11:03:44
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郭鸿儒

新虫 (初入文坛)

当然不能,不在细胞内锌指蛋白如何表达出来起作用?

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-01-26 19:55:19
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森林里的八嘎

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

体外剪切 √
重组修复 x

有商品型的cas酶
in vitro验证靶点切割靶片段可进行
最后得到3条带   完整条带 切断条带1 切断条带2
7楼2017-03-17 00:56:04
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1487298091

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

体外剪切当然可以了,是cas9酶和gRNA的功能,体外不好修复,除非有修复系统发挥作用。 细胞内有NEHJ,HDR等修复机制会修复DSB
8楼2017-03-24 12:27:36
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