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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CRISPR-Cas9体系可以在细胞外对DNA进行剪切编辑吗？
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membraneliu

铁虫 (正式写手)

[求助] CRISPR-Cas9体系可以在细胞外对DNA进行剪切编辑吗？ 已有2人参与

本人不是学生物的，但是对CRISPR-Cas9这个东西很感兴趣，但是又不太了解。有几个疑问想请教论坛里的大神
（1）我想知道，在细胞外，比如普通的PBS溶液里面有游离的DNA，往其中加入CRISPR-Cas9体系能不能对溶液中的DNA进行编辑呢？
（2）CRISPR-Cas9对DNA进行编辑可不可以只停留在剪切这一步，就是只把DNA切断但并不发生后续的替换之类的反应？怎么控制反应在切断后就停止呢？
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1楼 2017-01-02 23:13:50
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-03 07:46:17
剪断DNA后的连接和替换是由细胞内的DNA修复系统完成的，包括同源重组修复和非同源末端修复

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2楼2017-01-03 00:47:08
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匿名

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3楼2017-01-03 01:33:30
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tiffany123

木虫 (著名写手)
不能吧

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额尔古纳河右岸的露珠。
4楼2017-01-03 02:11:45
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2017-01-03 11:03:44
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郭鸿儒

新虫 (初入文坛)
当然不能，不在细胞内锌指蛋白如何表达出来起作用？

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6楼2017-01-26 19:55:19
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森林里的八嘎

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

体外剪切 √
重组修复 x

有商品型的cas酶
in vitro验证靶点切割靶片段可进行
最后得到3条带   完整条带 切断条带1 切断条带2
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7楼2017-03-17 00:56:04
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1487298091

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

体外剪切当然可以了，是cas9酶和gRNA的功能，体外不好修复，除非有修复系统发挥作用。 细胞内有NEHJ,HDR等修复机制会修复DSB
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8楼2017-03-24 12:27:36
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