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YYSOFT

新虫 (初入文坛)

[交流] TCA-丙酮提取蛋白的问题 已有1人参与

本人需要测定一种酶的蛋白浓度,用茚三酮法测定,以BSA为标曲,每次测得标曲线性都很好但是测出的结果总是偏高,因此后来提出用TCA-丙酮沉淀的方法先沉淀出蛋白,再水解成氨基酸后测。
但是做TCA-丙酮沉淀时遇到问题,就是沉淀离心后,加入丙酮后,混匀会发现沉淀不见了,似乎是溶解了,离心过后也没有沉淀,但是这种现象似乎只是在BSA样品上出现,酶样品沉淀还在,但不知道是不是也溶解了一部分。

本人操作步骤:
1、配置100%TCA溶液(500gTCA+227mL水)
2、1mL BSA样品(蛋白1000μg/mL)+ 250 μL TCA溶液
3、4℃放置1h
4、4℃,13000rpm离心10分钟
5、倒掉上清液,加入200μL -20℃丙酮(或乙醇)。
此时会发现沉淀消失(虽然本身沉淀也很少)
6、4℃,13000rpm离心后沉淀依然看不见

有两个问题,TCA和BSA应后,沉淀是蛋白本身吗?这个沉淀加入浓氢氧化钠后能否裂解成氨基酸?初学者,还望大神指教,谢谢!
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yudanxia

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,请问问题解决了吗?我最近也遇到一样的问题,一加丙酮原来的沉淀就溶解了,再大转速离心也看不到沉淀,求助啊
2楼2018-10-24 16:08:31
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