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TCA-丙酮提取蛋白的问题 已有1人参与
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本人需要测定一种酶的蛋白浓度，用茚三酮法测定，以BSA为标曲，每次测得标曲线性都很好但是测出的结果总是偏高，因此后来提出用TCA-丙酮沉淀的方法先沉淀出蛋白，再水解成氨基酸后测。 但是做TCA-丙酮沉淀时遇到问题，就是沉淀离心后，加入丙酮后，混匀会发现沉淀不见了，似乎是溶解了，离心过后也没有沉淀，但是这种现象似乎只是在BSA样品上出现，酶样品沉淀还在，但不知道是不是也溶解了一部分。 本人操作步骤： 1、配置100%TCA溶液（500gTCA+227mL水） 2、1mL BSA样品（蛋白1000μg/mL）+ 250 μL TCA溶液 3、4℃放置1h 4、4℃，13000rpm离心10分钟 5、倒掉上清液，加入200μL -20℃丙酮（或乙醇）。 此时会发现沉淀消失（虽然本身沉淀也很少） 6、4℃，13000rpm离心后沉淀依然看不见 有两个问题，TCA和BSA应后，沉淀是蛋白本身吗？这个沉淀加入浓氢氧化钠后能否裂解成氨基酸？初学者，还望大神指教，谢谢！ |
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