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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

[求助] pcr空白对照老是出现目的条带,做的我都生无可恋了,求指点 已有2人参与

最近在做pcr,空白对照老是出现条带,刚开始是引物二聚体和目的条带一起出现,现在只有目的条带,我都是在超净台做的

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哈哈
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生物狗-哈

新虫 (初入文坛)

这个问题应该是气溶胶污染,可以试试诺唯赞的试剂,他们家技术支持很给力
9楼2016-12-28 13:55:45
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普通回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是菌落pcr还是普通pcr,我觉得你可以尝试所有试剂都换一下尝试一下,包括所用的水,排除试剂的影响,看看是不是试剂受到污染。

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2楼2016-12-28 08:06:40
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3楼2016-12-28 08:13:02
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allegory

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

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4楼2016-12-28 08:47:30
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-28 08:06:40
是菌落pcr还是普通pcr,我觉得你可以尝试所有试剂都换一下尝试一下,包括所用的水,排除试剂的影响,看看是不是试剂受到污染。

普通pcr,做了好久都这样,做的都没信心了

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哈哈
5楼2016-12-28 10:47:43
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by allegory at 2016-12-28 08:47:30
肯定哪个试剂存在污染,否则不会这样。如果用新的去离子水都出来,那证明是PCR体系的其它试剂,建议全部换崭新的重新做。

恩,也打算买新试剂试试

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6楼2016-12-28 10:48:39
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能做出来PCR产物,需要酶, 模板,  引物。

考虑你的污染可能性,做阴性对照,   一组去掉酶,2组去掉模板,  3组去掉引物,4组去掉buffer,5组直接换一换水,

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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
7楼2016-12-28 11:25:31
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 夏至1990 at 2016-12-28 11:25:31
能做出来PCR产物,需要酶, 模板,  引物。

考虑你的污染可能性,做阴性对照,   一组去掉酶,2组去掉模板,  3组去掉引物,4组去掉buffer,5组直接换一换水,

谢谢,如果按照你的思路,1.3.4组应该没有条带,因为缺少酶,引物,或者buffer的话,即便污染了也估计p不出来,有点没理解过来

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哈哈
8楼2016-12-28 11:42:40
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生物狗-哈

新虫 (初入文坛)

这个情况可能是气溶胶污染了,可以试试诺唯赞的PCR试剂,他们家技术支持很给力
10楼2016-12-28 13:58:24
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