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pissor

木虫 (正式写手)

[交流] 在原核中表达的外源蛋白为何挂不到蛋白亲和柱上?【有效期至2009年1月10日】

    我用构建好的表达载体PET28a表达出外源蛋白后,过Ni-NTA柱子后,跑胶检测发现过柱后蛋白没有挂在柱子上,或者说挂在柱子上的蛋白较少,洗脱出的目的蛋白条带很弱。请教虫友帮忙解疑,这是什么原因?
     谢谢您热心的帮助!


[ Last edited by zzgyb on 2009-1-17 at 10:40 ]
游离在生存的边缘上,踯躅在科学的门外,溺死在知识的海洋中,转世在报恩的篱下。
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nnfyw

木虫 (著名写手)

4楼2008-12-10 12:42:47
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nnfyw

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
pissor(金币+5,VIP+0):您鞭辟入里的分析,我希望得到您的继续指导和帮助。
原因可能有以下几个:
1 你加的组氨酸标签在表达蛋白中没有充分暴露
2 所用的盐(NaCl)或咪唑的浓度不准确
3 重组蛋白表达量低
如果时目的条带较弱,可以用含有目点蛋白的收集液重新过柱,效果会好一点
2楼2008-12-10 08:17:53
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pissor

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by nnfyw at 12/10/08  08:17:
原因可能有以下几个:
1 你加的组氨酸标签在表达蛋白中没有充分暴露
2 所用的盐(NaCl)或咪唑的浓度不准确
3 重组蛋白表达量低
如果时目的条带较弱,可以用含有目点蛋白的收集液重新过柱,效果会好一点

您分析的很合理很全面,2和3我可以按照您说的重新做到,再次请教您:我如何做才能使得表达蛋白中的组氨酸标签充分暴露呢?
游离在生存的边缘上,踯躅在科学的门外,溺死在知识的海洋中,转世在报恩的篱下。
3楼2008-12-10 11:05:03
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nnfyw

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
pissor(金币+15,VIP+0):让我见识了不少,金币全给你,谢谢你的热心帮助!
5楼2008-12-10 12:43:08
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