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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于蛋白的复性
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云海寻烟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hc-material at 2017-01-11 13:08:06
HIs的包涵体可以柱上复性的，用NTA 的镍柱。变性情况下挂柱，然后梯度减少变形剂清洗，然后在用咪唑洗脱。祝顺利。

你好，请问你做过柱上复性吗？这几天要做，但是具体的细节不是很清楚，能麻烦指导一下吗？
1、溶解包涵体时，大概需要多少Tris-Hcl?
2、溶解时间多长合适呢？还是目测大致都溶解时就好？
3、柱上梯度复性和梯度洗脱的时候是要提前配置不同浓度的复性剂还是跟其他什么buffer按比例过柱呢？我们用的是AKTA的纯化仪。
麻烦帮帮忙，这几天就要做，所以比较急。
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11楼2017-03-12 19:43:31
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zhang001zh

银虫 (小有名气)
蛋白有点大，复性难度不低

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12楼2017-03-12 19:58:26
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