应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于蛋白的复性
52/1返回列表
查看: 2211  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白的复性 已有3人参与

表达了一个蛋白，融合组氨酸标签总共大小72kD左右，目前WB已经做出来了，诱导没问题但是都在沉淀里上清几乎没有，诱导条件也优化了没有什么改善，所以打算做复性，我看了一下序列，半胱氨酸有十几个，复性的时候会不会比较困难？柱上复性有哪些比较可靠的方法？还有就是假如复性成功了怎么区别复性和未复性的蛋白呢？有说可以跑非变性电泳，这块我不太明白

@hc-material @gyesang 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-12-17 23:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

云海寻烟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hc-material at 2017-01-11 13:08:06
HIs的包涵体可以柱上复性的，用NTA 的镍柱。变性情况下挂柱，然后梯度减少变形剂清洗，然后在用咪唑洗脱。祝顺利。

你好，请问你做过柱上复性吗？这几天要做，但是具体的细节不是很清楚，能麻烦指导一下吗？
1、溶解包涵体时，大概需要多少Tris-Hcl?
2、溶解时间多长合适呢？还是目测大致都溶解时就好？
3、柱上梯度复性和梯度洗脱的时候是要提前配置不同浓度的复性剂还是跟其他什么buffer按比例过柱呢？我们用的是AKTA的纯化仪。
麻烦帮帮忙，这几天就要做，所以比较急。
赞一下 回复此楼
11楼2017-03-12 19:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

云烟渺渺

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

低温诱导有尝试吗，例如16摄氏度诱导过夜。
复性会不会比较困难要尝试了才知道。
建议稀释复性，如果复性成功，你的蛋白不是有组氨酸标签吗，过一个HIS柱就可以了，如果在非变性条件下可以挂柱，基本上可以认为是复性成功的。
赞一下 回复此楼
2楼2016-12-29 12:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlbiosci

新虫 (正式写手)
可以尝试不同载体表达，比如psumo载体等。低温诱导是个好办法，降低iptg浓度等估计你也尝试了。对于是否复性成功，还是跑个非还原电泳吧。你的蛋白半胱氨酸多，很可能出现错配的大分子量多聚体，即便是挂柱了，也不是天然结构

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-12-29 12:57:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木子Jimmy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云烟渺渺 at 2016-12-29 12:08:21
低温诱导有尝试吗，例如16摄氏度诱导过夜。
复性会不会比较困难要尝试了才知道。
建议稀释复性，如果复性成功，你的蛋白不是有组氨酸标签吗，过一个HIS柱就可以了，如果在非变性条件下可以挂柱，基本上可以认为是 ...

请问，变形后的线性蛋白也能挂柱吗
赞一下 回复此楼
4楼2016-12-31 11:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭