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飞天超人

木虫 (正式写手)

[求助] 半制备液相色谱 water2965 出峰不稳定 请各位帮忙谢谢拉~ 已有3人参与

使用water 半制备液相色谱,图中有三个物质 均有强紫外吸收。
之前都很稳定 最近出问题了。 标品都走不稳

流动相是乙腈和水。 流速为1 ml/min  柱温35 摄氏度

图一 的梯度  20乙腈  经过10min 变为 45 乙腈, 保持1min 经过19 min 变为 100 乙腈, 此后立刻变化为 20/80 乙腈水,平衡6 min

图二 的梯度为 20 已经 经过11 分钟 变为 45 乙腈, 经过19 min 变为 100乙腈 , 此后立刻变化为 20/80 乙腈水,平衡6 min

图1

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图2
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半制备液相色谱 water2965 出峰不稳定 请各位帮忙谢谢拉~
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半制备液相色谱 water2965 出峰不稳定 请各位帮忙谢谢拉~-1
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xiaoboxia

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
单独看图的话,可能是泵的问题,可以自己验证下,纯水流速1.0ml/min,走1min,测其质量是否是1g;重复操作,确保数据的准确性。
2楼2016-12-15 13:49:38
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飞天超人

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoboxia at 2016-12-15 13:49:38
单独看图的话,可能是泵的问题,可以自己验证下,纯水流速1.0ml/min,走1min,测其质量是否是1g;重复操作,确保数据的准确性。

我刚才观察了一下,正常的话
初始压力 在0-4.5分钟内 都是2382向2339 变化的
在34分钟时候压力为2415 此后一直稳定到36分钟
接着走了一阵 到了36.62分钟时候压力就已经 2439 了 到了35.6分钟到最后 压力是 2467 (如果正常的话是 2421)
之后进样  进样后 压力立刻开始跳 1300/2100 这样的秒变,但是压差越来越小。
3楼2016-12-15 15:28:13
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376zfm

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你上图是同一样品重复么?还是16个批次的结果?如果不是同一样品重复,首先你做一下仪器重复性测试,同一样品,同一条件重复进样6针,看保留时间是否可重复,你可以算一下保留时间的RSD,一般应该在1%以下。如果重复性差,可能原因包括流动相不均匀、泵故障、色谱柱故障。流动相自己重配重新摇匀重新检测,色谱柱故障可以通过更换一根色谱柱来排除,泵等仪器故障打电话找售后技术支持。如果可重复,说明是仪器应该没问题,得从样品找原因,最常见的原因就是样品的酸碱度,解决办法为在水中添加缓冲盐(可添加的种类很多,自己百度)。
4楼2016-12-15 19:32:33
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llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉是仪器哪里有漏液 仔细检查下
5楼2016-12-16 13:28:01
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晏嫣晏嫣

新虫 (初入文坛)

看看你的单向阀是不是红宝石的,如果是红宝石的建议在流动相有乙腈的时候换成陶瓷的单向阀。不然会出现柱压不稳得情况。

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-12-17 08:20:31
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晏嫣晏嫣

新虫 (初入文坛)

我也碰到过类似的情况,如果没有陶瓷单向阀,建议流动相中降低乙腈比例。

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-12-17 08:22:00
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