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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提DNA过柱前为什么要加无水乙醇？
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tomcat521

银虫 (初入文坛)

[交流] 提DNA过柱前为什么要加无水乙醇？ 已有3人参与

用吸附柱法提全血基因组DNA，一般是20uL蛋白酶K+200uL全血+200uL裂解液，56°C 10min，之后要加200uL无水乙醇，然后过柱。

裂解后DNA和蛋白质等杂质都在一起了，直接过柱，然后漂洗两遍不就可以了吗？

为什么还要在过柱前加无水乙醇呢？
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1楼 2016-12-12 20:10:52
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)
★
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无水乙醇使DNA沉淀出来
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2楼2016-12-13 09:59:46
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xucb970

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dna容易水，不溶于乙醇，dna析出来才能留在吸附柱上，再用水溶解而得到dna溶液。不加乙醇就和废液一起倒掉了。

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宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
3楼2016-12-13 10:04:06
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ziaoqiang

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by xucb970 at 2016-12-13 10:04:06
dna容易水，不溶于乙醇，dna析出来才能留在吸附柱上，再用水溶解而得到dna溶液。不加乙醇就和废液一起倒掉了。

过柱前加无水乙醇把dna沉降下去，然后再转移到柱子里，没必要吧，dna还不是在底部

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4楼2016-12-14 11:51:44
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xucb970

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
4楼: Originally posted by ziaoqiang at 2016-12-14 11:51:44
过柱前加无水乙醇把dna沉降下去，然后再转移到柱子里，没必要吧，dna还不是在底部
...

离心10min，取上清，加无水乙醇，转移到柱子上，再离心，dna就留在柱子上了。

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宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
5楼2016-12-14 12:57:08
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