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逆转录之后进行特异性二链合成
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| 在使用NEB逆转录试剂盒进行cDNA一链合成后,得到RNA-cDNA的杂合链,想去掉杂合链中的RNA链,再加入自己设计的特异性引物进行二链合成,进行NGS测序,问题就是RNA链去除不掉,看到一个专利上可以用NaOH和MnCl2的方法进行断裂氢键,去除RNA,然后与酶Mix进行反应(猜测应该是RNA酶和DNA聚合酶),进行二链和合成能,但是没有具体的步骤,求大神指点,还有一个问题就是依赖DNA进行合成的DNA的聚合酶是不是就是以DNA作为引物进行DNA的合成的聚合酶?叫什么?谢谢了 |
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