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western blot法检测PKA如何选择抗体 急!!!谢谢
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| 因毕业需要做实验,从未接触过实验,望高手帮忙! 实验所需检测指标:western blot法检测PKA 取大鼠海马组织,提取总蛋白并用BCA法测定蛋白浓度。各样本蛋白上样量为12ug,经12%SDS-PAGE积层胶80v,分离胶120v(恒压)电泳,300mA(恒流)4℃转膜2.5h。用5%TBST-脱脂奶粉封闭2h,后加入兔抗PKAc单抗(1:2500)、兔抗β-action(1:600)4℃过夜。Ⅱ抗孵育1h,TBST洗5min x 3次。经ECL发光显影,曝光后将显影图像扫描至电脑进行分析。结果以目标条带的吸光度A值与同一样本β-action蛋白A值的比值表示。 可是不知如何选择抗体,望大神帮忙!万分感谢! |
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