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嘿嘿cj哈哈

铜虫 (正式写手)

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[交流] M13噬菌体ssDNA提取已有1人参与

试了好几次，不知道哪里出了问题，特来求助各位大神
我用JM109培养的M13噬菌体，步骤如下：
1.无抗LB培养基过夜培养JM109约14h
2.取1mL过夜培养的菌加入到100ml 2×YT培养基中（无抗）
3.230r摇床培养至OD值为0.5左右
4.加入噬菌体种子15μL，500μL 1M MgCl2
5.230r，培养5h
6.将上述溶液分到50ml离心管中，50ml/管，8000g 4℃离心20min，取上清，加入1.5g氯化钠，2.0gPEG8000，上下颠倒混匀，溶解后，冰浴15min
7.8000g 4℃离心30min，弃上清
8.500μL Tris（pH8.5）重悬噬菌体，再用250μLTris buffer清洗一下沉淀（取出50μL保存种子），此步得到的噬菌体沉淀就很少
9.10000g 4℃ 15min，重新转以上清至新的离心管中
10.加入200μL裂解液（0.2M氢氧化钠，1%SDS）迅速上下颠倒混匀，裂解2min
11.加入125μL醋酸钾（3M，pH5.5），颠倒混匀，冰浴20min
12.10000g 4℃离心15min，转移上清至新的离心管中
13.加入500μL无水乙醇，混匀，-80℃沉淀5min
14.10000g 4℃离心20min
15.弃上清，百分之75乙醇清洗
16.10000g 4℃离心15min
17.弃上清，无菌水溶解
18.nanodrop测浓度
最后有产物，但是电泳检测条带大小是不对的，应该是细菌的基因组。不知道哪里出了问题，别人寄来的噬菌体种子马上就要用完了，不知道各位大神有没有什么建议，还望指导一下。谢谢了！

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