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嘿嘿cj哈哈铜虫 (正式写手)
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[交流]
M13噬菌体ssDNA提取 已有1人参与
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试了好几次，不知道哪里出了问题，特来求助各位大神 我用JM109培养的M13噬菌体，步骤如下： 1.无抗LB培养基过夜培养JM109约14h 2.取1mL过夜培养的菌加入到100ml 2×YT培养基中（无抗） 3.230r摇床培养至OD值为0.5左右 4.加入噬菌体种子15μL，500μL 1M MgCl2 5.230r，培养5h 6.将上述溶液分到50ml离心管中，50ml/管，8000g 4℃离心20min，取上清，加入1.5g氯化钠，2.0gPEG8000，上下颠倒混匀，溶解后，冰浴15min 7.8000g 4℃离心30min，弃上清 8.500μL Tris（pH8.5）重悬噬菌体，再用250μLTris buffer清洗一下沉淀（取出50μL保存种子），此步得到的噬菌体沉淀就很少 9.10000g 4℃ 15min，重新转以上清至新的离心管中 10.加入200μL裂解液（0.2M氢氧化钠，1%SDS）迅速上下颠倒混匀，裂解2min 11.加入125μL醋酸钾（3M，pH5.5），颠倒混匀，冰浴20min 12.10000g 4℃离心15min，转移上清至新的离心管中 13.加入500μL无水乙醇，混匀，-80℃沉淀5min 14.10000g 4℃离心20min 15.弃上清，百分之75乙醇清洗 16.10000g 4℃离心15min 17.弃上清，无菌水溶解 18.nanodrop测浓度 最后有产物，但是电泳检测条带大小是不对的，应该是细菌的基因组。不知道哪里出了问题，别人寄来的噬菌体种子马上就要用完了，不知道各位大神有没有什么建议，还望指导一下。谢谢了！ |
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