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小汰宝

金虫 (正式写手)

[交流] 想看膜蛋白的表达,应该怎么跑蛋白胶? 已有2人参与

构建了一个质粒,可以表达44k左右的一个外膜蛋白,收菌后浓缩到10OD超声破碎5min, 然后离心12000rcf 10min,上清沉淀分别跑蛋白胶,看到沉淀没有过表达,上清在46kDa有明显过表达....本来以为这个46kDa就是目标蛋白了,但是发现未诱导的对照组里也有这个大小的过表达条带,所以我该怎么判断46kDa这个是不是目标蛋白?

后来看书上说,膜蛋白应该不溶于水,也就是说,膜蛋白其实不该出现在上清里嘛?
可是我看别人文献里有蛋白胶的图,一份写的是“膜的蛋白胶”还有一份是“上清的蛋白胶”,在前者里面可以看到清晰表达。
所以怎么才能做到跑一个“膜的蛋白胶”?
按我的破碎方法,膜蛋白应该出现在哪里?

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yuy111

银虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
If yo have antibody of the membrane protein, do western blotting.
2楼2016-12-10 12:40:44
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646865748

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
未加IPTG细菌有表达很正常,有些培养基中的一些糖类也有可能诱导质粒的表达。既然沉淀中没有这种蛋白,上清中有,那应该就是你要得蛋白,显然你表达的蛋白溶于水。建议看看报道该蛋白的相关文献里怎么说的,书中说的可能太笼统。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-12-11 08:59:41
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