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小汰宝金虫 (正式写手)
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[交流]
想看膜蛋白的表达，应该怎么跑蛋白胶？ 已有2人参与
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构建了一个质粒，可以表达44k左右的一个外膜蛋白，收菌后浓缩到10OD超声破碎5min, 然后离心12000rcf 10min，上清沉淀分别跑蛋白胶，看到沉淀没有过表达，上清在46kDa有明显过表达....本来以为这个46kDa就是目标蛋白了，但是发现未诱导的对照组里也有这个大小的过表达条带，所以我该怎么判断46kDa这个是不是目标蛋白？ 后来看书上说，膜蛋白应该不溶于水，也就是说，膜蛋白其实不该出现在上清里嘛？ 可是我看别人文献里有蛋白胶的图，一份写的是“膜的蛋白胶”还有一份是“上清的蛋白胶”，在前者里面可以看到清晰表达。 所以怎么才能做到跑一个“膜的蛋白胶”？ 按我的破碎方法，膜蛋白应该出现在哪里？ 新手求赐教  |
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2楼2016-12-10 12:40:44
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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未加IPTG细菌有表达很正常，有些培养基中的一些糖类也有可能诱导质粒的表达。既然沉淀中没有这种蛋白，上清中有，那应该就是你要得蛋白，显然你表达的蛋白溶于水。建议看看报道该蛋白的相关文献里怎么说的，书中说的可能太笼统。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-12-11 08:59:41