| 查看: 761 | 回复: 2 | |||
[求助]
高效液相分离/生物样品内源性干扰分离 已有1人参与
|
|
各位大神老师，大家好!我长话短说，直接上问题了，研究葛根素在小鼠体内的组织分布，内源性干扰峰干扰主成份的测定，求助大家分离方法 以肝脏样品为例 样品处理： 1：2生理盐水匀浆 500ul 匀浆液+40ul 12%乙酸+1ml 甲醇 沉淀蛋白，涡旋离心上清进样。 甲醇水，乙腈水的体系都试过 通过调节流动相比例 等度均不能实现分离 其中在一台岛津仪器（记为仪器A）上 色谱条件 乙腈：水=14：86 岛津C18色谱柱 （250*4.6，5） 检测波长250nm 流速1.0ml/min 柱温 30℃ 进样量 20ul 加标样品色谱图 http://muchongimg.xmcimg.com/dat ... _1481199097_383.jpg 11.310min处为主成份葛根素的峰，旁边的小拖尾即内源性干扰峰，理论上增加水相，保留时间延长，分离会更好。 相同色谱条件（色谱柱是同一根色谱柱） 同一个样品在另一台岛津仪器（记为仪器B）上无法重复上述色谱行为，返回去在仪器A上也无法重复，均出现是一单峰，些许拖尾。 无法实现分离后，尝试用梯度洗脱来实现分离。 首选用书上介绍的洗脱性强的溶剂做流动相 选用乙腈水体系 梯度条件 时间 乙腈比例 0min 11% 15min 26% 25min 11% 色谱图 http://muchongimg.xmcimg.com/dat ... _1481199845_637.jpg 干扰峰与柱成分峰有分离趋势 调整梯度条件 0min 5% 13min 18% 20min 18% 25min 5% 色谱图 http://muchongimg.xmcimg.com/dat ... _1481201525_207.jpg 干扰峰与主成份峰进一步分离 同样条件在仪器B上无法重复，且以下梯度条件均无法实现分离（显示一单峰） 0min 5% 13min 18% 18.7min出峰 20min 18% 25min 5% 0min 5% 18.7min出峰 20min 25% 25min 5% 0min 5% 25.549min出峰 40min 25% 45min 5% （仪器A为研究所仪器 不便借用） 理论上讲梯度可以讲这两个物质分离，在仪器B上确无法实现分离，着实让人不解，希望各路大神支招啊！先在这里谢谢大家了啊，祝大家身体健康，工作顺利！谢谢  加标样品色谱图  重复发的发错了  梯度1  梯度2 |
回复此楼» 猜你喜欢
救命帖
已经有7人回复
-
限项规定
已经有6人回复
-
西南交通大学国家级人才团队2026年博士研究生招生（考核制）—机械、材料、力学方向
已经有3人回复
-
英文综述是否需要润色及查重
已经有5人回复
-
为什么nbs上溴 没有产物点出现呢
已经有9人回复
-
招博士
已经有3人回复
-
最失望的一年
已经有18人回复
wyy080214
实习版主 (职业作家)
-
专家经验: +1209 - ACI: 16
- 应助: 1792 (讲师)
- 贵宾: 0.129
- 金币: 21948.5
- 散金: 76
- 红花: 152
- 帖子: 3144
- 在线: 266.3小时
- 虫号: 2718811
- 注册: 2013-10-12
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
- 管辖: 分析
2楼2016-12-09 15:45:20
3楼2016-12-09 16:17:17