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DNA纯化实验
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DNA纯化可以：（1）获得高纯度的DNA；（2）浓缩DNA；（3）用于测序、遗传信息分析等分子生物学应用。 PCR清洁试剂盒纯化法 实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性，所以被分离开来。 实验材料 PCR产物 试剂、试剂盒 PCR清洁试剂盒 仪器、耗材 96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板 实验步骤 一、试剂盒组成、贮存、稳定性 1. 说明书，耗材：96孔DNA制备板，96孔1.6 ml深孔板，96孔V型底板。 2. Buffer PCR-A：DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀，应于65°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。 3. Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上指定的体积加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。 4. Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室温密闭贮存。 二、操作步骤 用户可以选择负压法或离心法。 A. 负压法 1A. 正确连接负压装置，将96孔DNA制备板置于负压装置上；在PCR、酶切、酶标或测序反应液中，加3个体积的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混合均匀后转移到96孔DNA制备板中，开启并调节负压至-25-30英寸汞柱，缓慢吸掉板中溶液。 2A. 加0.3 ml Buffer W2，吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤两次。 * 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 3A. 保持负压将96孔DNA制备板抽吸10 min。 4A. 导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。 5A. 将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室温静置1 min。≥3 000×g离心5 min洗脱DNA。 B. 离心法 1B. 在PCR、酶切、酶标或测序反应液中，加3个体积的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混匀后，转移到96孔DNA制备板中，将96孔DNA制备板置于96孔1.6 ml深孔板中，1 000×g离心1 min，弃滤液。 2B. 在96孔DNA制备板中，加0.3 ml Buffer W2，1 000×g离心1 min，弃滤液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤一次。 * 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 3B. 将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中，≥3 000×g离心10 min。 4B. 将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室温静置1 min。≥3 000×g离心5 min洗脱DNA。 注意事项 1. 将洗脱液或水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。 2. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脱液中保存。 |
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