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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)

[求助] 分子筛 杂质 已有2人参与

分子筛柱子分析蛋白,结束后水相冲洗下来的峰是小分子蛋白吗?

目标蛋白分子量在6K左右,使用柱子是AdvanceBio SEC,130A,2.7um.  流速0.5ml/min。 单一流动相150mM PB (ph=7.0)  



每次图谱结束后,用纯水洗柱子,在这个过程中开紫外检测器发现会出来一个很高的峰。高度在1000左右,(样品吸收峰在200左右)
想请教一下这个峰是不是蛋白峰?是不是样品降解产生的杂质峰?
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

分子筛介质分离过程是不存在也不允许存在化学反应的。蛋白和柱子、缓冲液和柱子、缓冲液和蛋白都不存在化学反应。要保证蛋白的活性,不降解蛋白。分子筛分离纯化是大分子先出来,小分子后出来。全排阻的大分子根本不进介质的孔,全渗透的小分子是要进去介质的孔的,出来比较慢,你后面用纯水还能洗出来蛋白那就是全渗透的小分子。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-02-13 17:06:39
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也不一定,具体情况具体分析,曾今碰到过一次盐浓度过高,导致柱后存在溶剂峰。你可以把缓冲液单独跑一个看看,如果没有,那么多半是你蛋白溶液中的小分子。不过分子量小于10kd的蛋白分子,很难再进行细致分离了。多考虑考虑外部因素
3楼2017-02-14 14:00:50
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