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学习有助成功

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白测序相关 已有1人参与

想问一下做过蛋白N端测序的，用岛津的PPSQ-31B测序，样品前处理是怎么样的？能不能提供一份详细的步骤和说明，目前只知道可以电泳后转印，但是具体怎么做的完全不了解，测序都可以对哪些处理样品进行上样分析？还希望做过的给提供个文本说明，越详细越好，感激不尽。另实验室有个伯乐的快速转印系列，没用过……

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1楼 2016-12-05 22:36:56
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京农检测

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、N端测序（PPSQ系列仪器），可以接受3种状态的样品：PVDF膜；液体；固体
2、各种状态样品要求不一样:
   PVDF形式的：要求电泳前的样品，可以是混合样，但要求自己的测序目的条带要单一，无交叉条带干扰；
   液体形式的：样品要求是纯品 95%以上，缓冲介质要求是水或者挥发性液体；
  固体形式的：样品要求纯度95%以上，固体中出目标物以外，无其他杂志，如赋形剂，盐分介质等。
3、如果样品不能满足上面状态，很多公司也是可以帮你完成样品除杂，提纯的。可以联系：北京农业生物检测中心
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2楼2017-01-16 17:34:38
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)
首先使用1D或者2D胶将蛋白进行分离。接着把蛋白胶上的样品转移至PVDF膜上；注意不要使用硝酸纤维素膜。在此过程中请佩戴手套和头套，避免自身角蛋白对测序结果的影响。转膜完成后，可以使用考马斯亮蓝或者立春红对PVDF膜进行染色；注意不要使用银染的方法进行染色。染色完成之后，可以使用双蒸水对PVDF膜进行清洗。如果转膜的缓冲液中含有甘氨酸，需要对PVDF膜进行多次冲洗，以避免甘氨酸对后续分析的影响。PVDF膜染色后，靶条带清晰可见，用洁净的解剖刀将靶蛋白条带切下。在蛋白量允许的情况下，可以准备2-3条靶条带以增加靶蛋白的量。以上就是蛋白N端测序样品制备的简要过程。
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3楼2017-10-02 16:19:48
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