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playboy723金虫 (正式写手)
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[交流]
如何扩质粒？
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各位虫友 我想扩一个基因 可我没有该基因的基因序列 但我要到的一个质粒上有该基因的序列 于是我想把该基因扩下来并连到我的目的载体上，于是我进行了下面的步骤： 1、设计引物 引物5，端加了EcoR1的酶切位点 2、TD-PCR扩增质粒上的该基因 3、将PCR产物连到T载体上 4、测序 测序结果是T载体上连上了不仅包括该基因 甚至连该基因的5，和3，端也连上了 可是没有我的EcoR1酶切位点 就是说在PCR时没有忠实的履行引物、模板完全匹配后然后扩增的原则（就是说在延伸时延伸到reverse引物的5，端时并没有停止 也没有与引物5，端的酶切位点互补结合 而是仍与质粒本身的序列互补结合 并一直延伸下去） 各位虫友遇到过这种情况没 大家帮我分析一下 我该怎么办？ 谢谢 [ Last edited by 350784478 on 2009-7-2 at 09:45 ] |
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