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Nigori

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[交流] 流式细胞术间接免疫荧光标记的样品制备实验已有1人参与

一、制备前——培养细胞

1. 培养细胞用0.25%的胰酶消化。

2. PBS或生理盐水洗涤细胞2次，再用PBS或生理盐水悬浮细胞，加入预冷的无水乙醇，终浓度为60%～70% ，快速混匀，并用封口膜封口，置4℃下可保存15天左右。

二、制备

1. 取1×106个细胞/100μl，先加入一抗混匀，置室温下避光反应30min。

2. 用PBS洗涤细胞2次，离心沉淀弃掉上清液（离心转数一般为800～1000rpm，5min）。

3. 00μl PBS重悬细胞，再加入FITC或PE标记荧光二抗（用量均按说明书要求加入）混匀，室温下反应30min。

4. PBS再洗涤细胞2次，加入500μl PBS重悬成单细胞悬液，上机检测。

注意：染色的抗体加入量和反应时间，一般根据试剂使用说明书的要求进行。若说明书上未说明，应先进行预实验，掌握好剂量与最佳反应时间后，再进行流式样品的制备。制备好的样品，若不能及时上机检测，用1%～4%的多聚甲醛固定，4℃下可保存5天。

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