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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何使pcr产物是环状的，求指导
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寰宇清

新虫 (小有名气)
设计5'端反向互补的两条引物，朝外扩。产物用DNPI酶处理，切碎野生型有甲基化的模板，转化大肠杆菌，涂板鉴定，阳性率一般来说极高。

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11楼2016-11-30 20:39:47
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
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11楼: Originally posted by 寰宇清 at 2016-11-30 20:39:47
设计5'端反向互补的两条引物，朝外扩。产物用DNPI酶处理，切碎野生型有甲基化的模板，转化大肠杆菌，涂板鉴定，阳性率一般来说极高。

那我是设计完全互补的两条引物1和1’呢，还是设计部分互补的2和2’呢？
如何使pcr产物是环状的，求指导



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当你当你的眼睛眯着笑
12楼2016-11-30 21:08:30
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寰宇清

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 痞子无敌 at 2016-11-30 21:08:30
那我是设计完全互补的两条引物1和1’呢，还是设计部分互补的2和2’呢？

...

图片看不见。当然不能完全互补。

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13楼2016-12-01 07:06:48
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寰宇清

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 痞子无敌 at 2016-11-30 21:08:30
那我是设计完全互补的两条引物1和1’呢，还是设计部分互补的2和2’呢？

...

喔，看见了。完全互补的引物自己结合了。引物2的互补部分还是太多。有6个碱基互补就够了。

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痞子无敌
14楼2016-12-01 07:08:54
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 寰宇清 at 2016-12-01 07:08:54
喔，看见了。完全互补的引物自己结合了。引物2的互补部分还是太多。有6个碱基互补就够了。
...

谢谢～～

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当你当你的眼睛眯着笑
15楼2016-12-01 08:56:09
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by 寰宇清 at 2016-12-01 07:08:54
喔，看见了。完全互补的引物自己结合了。引物2的互补部分还是太多。有6个碱基互补就够了。
...

还想问一下，因为我做的的是CRISPR,所以我设计的引物需要有20bp不同源的片段，那么同源臂需要怎样设计？
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当你当你的眼睛眯着笑
16楼2017-01-15 21:44:09
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