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冻融法回收DNA片段操作步骤
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1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中； 2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀； 3. -20℃放置5-10min； 4. 4℃离心10000g×5min，上层液转移置另一离心管中； 5. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，振荡混匀； 6. -20℃，放置5-10min； 7. 4℃离心10000g×5min，合并上清液； 8. 用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次，取上清； 9. 加入1/10体积3M NaAc（pH 5.2）、2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀； 10. -20℃，静置30min； 11. 4℃离心13000g×10min，弃上清，75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干； 12. 加适量H2O或TE溶解沉淀。 |
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