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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助大肠杆菌B21和B21(DH3)有何不同

如题,我想转化pET28a,不知用哪一个好一点?
用TOP10或JM109或DH5a行不行?
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

顶一下!
2楼2008-12-04 17:58:45
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

我用TOP10和DH5a转化pet28a,结果转化子都提取不出质粒来!
3楼2008-12-04 18:01:02
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catzp

银虫 (小有名气)

DH5a应该可以用来克隆PET载体,不过我用的是DH10B,效果也不错。
BL21是常用的表达菌株,一般配合以强表达载体来进行目的基因的强表达。
BL21(DE3) 菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
BL21(DE3)pLysS对λDE3(1)是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I,编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21(DE3)pLysS含有pLysS质粒,他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下,T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白
4楼2008-12-04 20:00:54
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

那请教catzp ,你的意思是BL21,BL21(DE3) ,BL21(DE3)pLysS都可以作为pET28a的宿主,只是视目的基因而定了?
5楼2008-12-04 23:38:58
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

对的 都可以用来转化pET28a
但是你诱导蛋白的话最好用BL21(DE3)
6楼2008-12-05 19:20:21
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