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popstar_chou

木虫 (正式写手)

[求助] 求助安捷伦gpc测定多糖分子量计算 已有2人参与

本人在做一个多糖的分子量和分子量分布,之前用的是岛津液相示差检测器和gpc,方法很成熟。该多糖的重均分子量在9万-13万之间。
最近单位安排用安捷伦1100、工作站chemstationB.03.02和安捷伦gpc分析模块B.01.01做分子量测定,采用五个分子量的右旋糖苷做对照品,示差检测器采集信号,以对照品重均分子量取对数lgMw对保留时间(min)进行线性拟合。按公式式计算重均分子量:
MW=∑(RIiMi)/∑RIi
式中 RIi 为洗脱的i级分的物质的量,即示差色谱图的峰高;Mi为示差色谱图上每个时间点级分计算出来的分子量。
图谱跑出来质量很好,但是计算出分子量数量级不对,大于100万,本人已无计可施。如能帮忙分析图谱并指出可能的原因,感激不尽啊~
请教虫虫有没有熟悉的帮忙算一下,图谱上传作为附件(图谱标准品重均分子量按顺序分别为9750Da、13050Da、36800Da、64650Da、135350Da)。在线等~
非常感谢!
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  • 附件 1 : 谱图.zip
  • 2016-11-26 20:24:34, 401.13 K

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狗狗
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
popstar_chou: 金币+30, ★★★很有帮助, 战友给出的思考角度很有参考价值,非常感谢! 2017-04-12 20:46:32
因为你算的是相对分子量,不同仪器上色谱柱型号不同,温度不同,流速不同,同一个样品得到不同的相对分子量很正常

发自小木虫IOS客户端
提供GPC服务
2楼2016-11-27 16:41:24
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asciii

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
popstar_chou: 金币+30, 有帮助, 谢谢,但是因为这一关没有过去,所以没做成标曲。已做的标曲是岛津软件,不适用 2017-04-12 20:48:14
没有这个软件看不到图谱。能把以前和现在的GPC的图谱和标准曲线贴出来吗?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2016-11-29 08:50:57
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disl

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by asciii at 2016-11-29 08:50:57
没有这个软件看不到图谱。能把以前和现在的GPC的图谱和标准曲线贴出来吗?

用的什么流动相,柱子干净吗?柱子的历史很重要。保证没有吸附才对。标准为啥要右旋的。用葡聚糖不知行不。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

这是个乐园。
4楼2016-11-30 20:11:08
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popstar_chou

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by asciii at 2016-11-29 08:50:57
没有这个软件看不到图谱。能把以前和现在的GPC的图谱和标准曲线贴出来吗?

已经解决这个问题了。自己试着调整各种参数,原来是未指定峰起止点,我以为手动积分谱图上处理了就可以。感谢!

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狗狗
5楼2016-12-10 13:39:31
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popstar_chou

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by disl at 2016-11-30 20:11:08
用的什么流动相,柱子干净吗?柱子的历史很重要。保证没有吸附才对。标准为啥要右旋的。用葡聚糖不知行不。
...

谢谢,柱子是新的,问题已解决!

发自小木虫Android客户端
狗狗
6楼2016-12-10 13:40:09
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popstar_chou

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by disl at 2016-11-30 20:11:08
用的什么流动相,柱子干净吗?柱子的历史很重要。保证没有吸附才对。标准为啥要右旋的。用葡聚糖不知行不。
...

用的就是多糖类分析常用流动相0.1M硫酸钠,柱子是新买的,不到一个月,进样不到十次,可以排除流动相和柱子的问题。标准品好像中检所只有右旋的,这个用于做窄分布标准曲线的标准品应该选与样品尽量相似的,葡聚糖应该还是不行。之前做过筛选,发现不合适,所以没选用,谢谢您!
狗狗
7楼2017-04-12 20:51:42
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