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miawu

新虫 (小有名气)

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[求助] 请教申请细胞分离技术——为什么我总是得到细胞的同时得到很多破碎的组织？

分的是海马细胞，没什么特别的，就是普通的分离，剪碎，消化，终止消化，解离液洗一下，Dnase+BME吹打十次，冰里面沉淀数分钟后收上清离心收细胞。
现在问题来了，1，请教大神分离海马细胞的小鼠stage，消化时间，还有能分出多少细胞，这些参数有人可以分享一下吗？
                     2，有没有人尝试过用P8-P16的stage小鼠的？
                     3，总是有组织碎片是怎么回事？是我消化太过了吗？P3消化8min是可以得到破碎组织较少，但是细胞数量也非常少，P9消化20min左右，孔板                               中百分之六十破碎组织，百分之三四十细胞的样子。而且破碎组织看起来大小跟细胞一个数量级的，所以没办法用筛网滤掉。