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QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
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植物材料 用最精确的方法,称取不超过100mg的植物材料,置于处理过的研钵,加入液氮进行研磨 将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备),注意材料要保持冷冻状态 加入450μL Buffer RLT(1mL 加入10μL β-巯基乙醇),颠倒混匀,涡旋 将溶解物转移至于淡紫色的QIAshredder spin column,最大转速离心2分钟,取上清转移至新的2mL的收集管(自备) 加0.5倍体积(约225μL)的无水乙醇,迅速吹打混匀 将样品(约650μL )转移至带有2mL回收管的粉色RNeasy spin column(以下简称column),>=8000g离心15s,将滤出物丢弃 加入700μL Buffer RW1至column,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物和收集管 转移column至新的收集管(提供),加入500 μL Buffer RPE,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物 再加入500μL Buffer RPE,>=8000g离心2分钟清洗柱子上的滤膜 (为了保证除净Buffer RPE,可弃旧的收集管和滤出物,取新收集管(自备) 最大转速离心1分钟) 转移RNeasy spin column至1.5mL收集管(提供),加入30-50μl 无RNA酶的水于滤膜上,>=8000g离心1分钟,洗脱RNA (如果预期得到的RNA大于20μg,可重复第十步) |
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