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13132551195新虫 (小有名气)
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肠激酶酶切肝素酶1 已有1人参与
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最近在做肠激酶酶切带有标签的目的蛋白。我做了对照，对照组可以跑出条带。而酶切的什么条带都没有。想不通问题出在哪里 @天使托 发自小木虫IOS客户端 |
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ganchao1776
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2楼2017-03-17 13:17:57
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- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2017-03-17 18:15:02
【答案】应助回帖
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上海雅心生物技术有限公司 重组肠激酶 推荐使用方法 1）25℃酶切条件： 按照酶活性定义，酶切条件举例： 25mM Tris-HCl 8.0体系中： 融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白总量50-100μg） 重组EK 0.1-0.2U 25℃过夜酶切，或完全酶切需12-16h，用SDS-PAGE 检测酶切效果。 2）4℃低温酶切条件： 4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至48-64h，或增加2-3倍酶量。 3）酶切优化和放大 优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH，融合蛋白浓度，EK的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用SDS-PAGE检测酶切效果。 放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大，用SDS-PAGE检测酶切效果。 4）去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析（例如sigma T0637）去除重组肠激酶。 5）注意：不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。 |
4楼2017-09-25 13:40:45
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