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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 我做三亲结合，受体菌无抗性
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yueping

铜虫 (初入文坛)

[求助] 我做三亲结合，受体菌无抗性

我做三亲结合，受体菌无抗性，自杀之粒（也就是用于构建供体菌的）有kan抗性sacB基因，据说可以利用蔗糖反筛选，是不是第一次是在KAN筛，第二次是不能在kan长，能在蔗糖上长的就是需要的菌株呢？做过这方面的同学，有没有什么建议或看法？希望大家给与帮助，非常谢谢。
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1楼 2016-11-23 13:12:52
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远丽123

金虫 (小有名气)
首先你的受体菌要有抗性 用你的受体菌的抗性和自杀质粒的抗性第一次筛选 再用PCR验证 最后用sacB筛选 如果只用kan筛选长出来的可能是自杀质粒也可能是接合成功的 会长很多 验证的时候很麻烦

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2楼2016-11-29 00:14:37
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yueping

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 远丽123 at 2016-11-29 00:14:37
首先你的受体菌要有抗性 用你的受体菌的抗性和自杀质粒的抗性第一次筛选 再用PCR验证 最后用sacB筛选 如果只用kan筛选长出来的可能是自杀质粒也可能是接合成功的 会长很多 验证的时候很麻烦
...

嗯，谢谢您的回复。但受体菌是野生菌，没抗性。。。
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3楼2016-12-05 15:37:56
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