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yueping

铜虫 (初入文坛)

[求助] 我做三亲结合,受体菌无抗性

我做三亲结合,受体菌无抗性,自杀之粒(也就是用于构建供体菌的)有kan抗性sacB基因,据说可以利用蔗糖反筛选,是不是第一次是在KAN筛,第二次是不能在kan长,能在蔗糖上长的就是需要的菌株呢?做过这方面的同学,有没有什么建议或看法?希望大家给与帮助,非常谢谢。
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远丽123

金虫 (小有名气)

首先你的受体菌要有抗性 用你的受体菌的抗性和自杀质粒的抗性第一次筛选 再用PCR验证 最后用sacB筛选 如果只用kan筛选长出来的可能是自杀质粒也可能是接合成功的 会长很多 验证的时候很麻烦

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2楼2016-11-29 00:14:37
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yueping

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 远丽123 at 2016-11-29 00:14:37
首先你的受体菌要有抗性 用你的受体菌的抗性和自杀质粒的抗性第一次筛选 再用PCR验证 最后用sacB筛选 如果只用kan筛选长出来的可能是自杀质粒也可能是接合成功的 会长很多 验证的时候很麻烦
...

嗯,谢谢您的回复。但受体菌是野生菌,没抗性。。。
3楼2016-12-05 15:37:56
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