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[求助]
制备DC细胞，T细胞 已有1人参与
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机械学术，请教 外周血如何分离分化得到DC细胞，T细胞。 DC细胞： 取志愿者外周血，肝素抗凝，ficoll（1.077g／mL）密度梯度离心，取界面层细胞，PBS 洗涤； 加入AIM-V 培养基， 100％湿度、37℃、5％ CO2培养箱中孵育1．5 ～ 2．0 h， 去悬浮细胞， 加入AIM-V 培养基及rhGM-CSF 800 U／mL 和 IL-4 500 U／ mL，每48 小时更换培养基并补加上述两种细胞因子；第5 天加入TNF-α 250 U／ mL，继续培养至第7 天DC 成熟。 制备淋巴细胞，取供者外周血， 方法同上取悬浮细胞，D-Hank′s 液洗涤，加入处理好的尼龙毛柱，孵育1．0 h；用37℃ D-Hank′s 液 冲洗出游离细胞，即T 淋巴细胞。 以上是我从中文文献中找到的获取细胞的办法。疑问之处在于“去悬浮细胞”是否笔误？ 请研究细胞免疫的前辈指导，是否还有其他制备方法。 |
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