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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR阳性
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
假阳性吧，做菌落PCR的时候我通常一端用载体上的引物，一端用基因上的特异性引物。这样做基本没什么假阳性。

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11楼2016-11-25 18:19:16
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)
单独的质粒跑个胶看看，菌液pcr假阳性还是挺高的

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Comeon！
12楼2016-11-25 23:11:39
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生物狗-哈

新虫 (初入文坛)
可能是菌液鉴定时的假阳性，有时候平板上的PCR产物也可能会被扩增出来。我用的Clonexpress，这个试剂盒成功率非常高，一般第二天就可以拿到克隆，阳性率也相当的高。
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13楼2016-12-28 15:48:25
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

菌液PCR最好选用载体一端引物和目的片段一段引物扩增，扩初来的很亮的条带，基本上可以确定已经构建到载体上了。直接用目的片段两端引物扩增，假阳性非常高
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14楼2016-12-28 20:38:16
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涯天一方

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by bobmeng2 at 2016-11-25 00:05:46
应该不是质粒浓度的问题。稀释之后还是没有p出，然后对照就是拿之前连过相似片段的质粒做的，浓度也很高。。不过现在重新扩增了片段，重新连得，已经得到阳性结果了。谢谢大家
...

我已经连了好多次了，质粒就是比预期的要小，酶切后也只有一条带，用该质粒为模板做pcr，却p不出条带，是什么原因呢
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15楼2017-07-07 00:26:52
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