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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)

假阳性吧,做菌落PCR的时候我通常一端用载体上的引物,一端用基因上的特异性引物。这样做基本没什么假阳性。

发自小木虫Android客户端
11楼2016-11-25 18:19:16
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)

单独的质粒跑个胶看看,菌液pcr假阳性还是挺高的

发自小木虫Android客户端
Comeon!
12楼2016-11-25 23:11:39
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生物狗-哈

新虫 (初入文坛)

可能是菌液鉴定时的假阳性,有时候平板上的PCR产物也可能会被扩增出来。我用的Clonexpress,这个试剂盒成功率非常高,一般第二天就可以拿到克隆,阳性率也相当的高。
13楼2016-12-28 15:48:25
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

菌液PCR最好选用载体一端引物和目的片段一段引物扩增,扩初来的很亮的条带,基本上可以确定已经构建到载体上了。直接用目的片段两端引物扩增,假阳性非常高
14楼2016-12-28 20:38:16
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涯天一方

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by bobmeng2 at 2016-11-25 00:05:46
应该不是质粒浓度的问题。稀释之后还是没有p出,然后对照就是拿之前连过相似片段的质粒做的,浓度也很高。。不过现在重新扩增了片段,重新连得,已经得到阳性结果了。谢谢大家
...

我已经连了好多次了,质粒就是比预期的要小,酶切后也只有一条带,用该质粒为模板做pcr,却p不出条带,是什么原因呢
15楼2017-07-07 00:26:52
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