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人胰腺癌裸小鼠模型的建立实验
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人胰腺癌裸小鼠模型的建立可以： （1）用于胰腺癌的诊断； （2）用于胰腺癌治疗的研究； （3）观察胰腺癌细胞株在移植前后形态学是否发生变化。 实验方法原理 将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下，每周测量肿瘤大小，第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查，放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养，HE 染色。 实验材料 裸小鼠BALB c nu-nu、胰腺癌细胞株8988 试剂、试剂盒： RPMI-1640 完全培养基、胰酶、戊二醛 仪器、耗材： CO2 培养箱、试管 实验步骤 一、实验材料准备 裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周龄，体重16～20 g，雌雄兼备，SPF 级环境中饲养，恒温25～27 ℃，恒湿45%～50% ，饮用水及食物均经灭菌。 二、人胰腺癌细胞株8988 体外传代培养 1. 将人胰腺癌细胞株放入含10 %的RPMI-1640 完全培养基中，置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中，每2d 换液1次，2～3d，0. 25 %的胰酶消化，一传3 传代培养。 2. 待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液，每只5 ×106 肿瘤细胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腋窝处皮下，建立肿瘤模型。 3. 每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V= π/ 6 ×长×宽×高，计算肿瘤大小，并绘制生长曲线。 三、血清学检测 第6 周时拔眼球法处死小鼠，收集血液于试管中，静置取血清，检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。 四、巨检 1. 处死裸鼠后，皮下剥离肿瘤，记录质地、浸润、血供情况，观察有无腹腔粘连，各脏器转移状况。 2. 将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。 五、病理学检测 上述标本常规石蜡包埋切片，HE 染色，光镜观察。 六、超微结构观察 肿瘤组织2. 5 %戊二醛，1 %锇酸双固定，包埋，超薄切片，铀铅双重染色，透射电镜观察。 七、镜检 1. 肿瘤组织细胞培养及活细胞观察：取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织，PBS 漂洗3 次，剪成1 m3 大小，0. 25 %的胰酶消化，去除粗大组织后，制成单细胞悬液，置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养，倒置显微镜下观察其形态、生长情况等， 并与细胞株8988 进行比较。 2. 细胞HE 染色及形态学观察：肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中， 生长至次融合后，弃培养基，PBS 洗3 次，2. 5 %戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，光镜下观察比较。 |
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