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生物素-亲和素放大系统放大抗体信号的问题 已有2人参与
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| 各位大神们，哪位可以解答一下这个问题：双抗体夹心法测抗原，生物素化抗体A+无修饰抗体B能放大；但是若将抗体B生物素化，不修饰A抗体，（就是顺序颠倒一下）就不会放大信号。谁能解释一下，万分感谢！ |
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3楼2016-11-16 13:05:13
wangxingjia
铁虫 (小有名气)
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- 专业: 免疫生物学
2楼2016-11-16 10:10:16
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
meijiafei: 金币+10, ★有帮助 2016-11-17 12:19:45
感谢参与，应助指数 +1
meijiafei: 金币+10, ★有帮助 2016-11-17 12:19:45
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1.抗体B生物素化后可能会影响其结合位点，导致其和抗原的结合能力减弱。 2.还有种可能是抗体A以被动吸附的方式包板后，其构型发生了一定改变影响了其结合位点。 关于这两点的确认建议： 1.通过抗Fc酶联抗体去评估一下生物素化前后，抗体A和抗原其结合能力是否发生改变（抗原少量包被，测试抗体B生物素化前后剂量曲线，通过EC50比较） 2.抗Fc抗体包被酶标板条，加入抗体A和直接包被抗体A，然后加抗原，加抗体B，酶联抗体显色，比较一下信号大小 ELISA的信号大小受很多因素影响，一般会有一定波动，一般可以通过调整酶联抗体的浓度把信号维持在一个相对稳定的值 |
4楼2016-11-16 17:18:54
6楼2016-11-19 21:59:15