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gxqAlice

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助 M15蛋白表达量很低 已有5人参与

大家好,最近在表达蛋白,载体是pQE-9,表达的菌株是E.coliM15,蛋白的分子大约在23kd,我是用之前保存的甘油菌,甘油菌也是最近保存的,先用37度,150rpm/min摇菌一夜,第二天早上1:30扩大的,等吸光度达到0.6-0.8时加IPTG进行诱导,之后30度,200rpm/min诱导6h,收菌后用超声波破碎的。这个步骤是之前师姐摸索的,但我最近做的时候发现表达量相较师姐的低很多,想求助各位大神,帮帮我,谢谢
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-16 23:59:41
重新转化一下挑单克隆吧!

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2楼2016-11-12 08:03:59
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lemonvivi

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以诱导时间长一点

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3楼2016-11-12 09:00:52
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个是包涵体表达么?

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I am not a hero , but I served with heroes!
4楼2016-11-14 06:24:47
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baishaoyun

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-14 07:40:48
建议重新用重组质粒转化挑单菌落做,用保存的甘油菌确实会表达量降低的,这个是有文献报道的

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5楼2016-11-14 07:33:48
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781055707

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有就行了,低一点很正常的。
采菊东篱下,悠然见南山。
6楼2016-11-14 08:07:28
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