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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT PCR对照组有结果实验组没有，疑惑
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921206

新虫 (初入文坛)

[求助] RT PCR对照组有结果实验组没有，疑惑 已有2人参与

求助：本人用DSS建立结肠炎小鼠模型，提取结肠组织RNA，逆转录，进行RT PCR，做了三次都是只有正常组有结果，实验组没有，疑惑不解，求指教，图1是扩增曲线，实验组均没峰值，图2是实验组的溶解曲线，均为这种波浪形

RT PCR对照组有结果实验组没有，疑惑


RT PCR对照组有结果实验组没有，疑惑-1


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1楼 2016-11-10 20:53:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖 2016-11-10 22:07:08
xn8008: 应助指数+1 2016-11-10 22:07:14
RNA都检测了不？ACTIN有没有，最好PCR先电泳一下。

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3楼2016-11-10 21:35:41
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921206

新虫 (初入文坛)
除了模版，SYBR，引物，水都是预混好，分装的，查了文献说是DSS对PCR有影响，要对提取的RNA进行mRNA纯化，谢谢大家解答

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10楼2016-11-16 22:58:47
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921206

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by liuye1990 at 2016-11-17 19:47:14
如果你实验组和对照组的RNA是一起提出来的，多半情况是ACTIN引物有问题了

也不是引物的问题，所有体系都是预混在一起分装的，是我建造模型用的试剂DSS引起的，

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12楼2016-11-17 22:42:06
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普通回帖

921206

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖 2016-11-10 22:07:00
顶一下

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2楼2016-11-10 21:21:33
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921206

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mlxmiao at 2016-11-10 21:35:41
RNA都检测了不？ACTIN有没有，最好PCR先电泳一下。

RNA浓度和纯度都可以，逆转录和正常组都一样

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4楼2016-11-10 22:05:48
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
引物没有加吧？体系再检查一下。

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5楼2016-11-10 23:01:15
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gaoyunzhen

铁虫 (正式写手)
1.实验组该基因不表达；2.实验组RNA有问题或者逆转录。

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6楼2016-11-12 06:42:14
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会实验组RNA提取出问题了呀
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···
7楼2016-11-12 10:58:57
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许彦

木虫 (正式写手)
体系有问题，根本就没有扩增，具体出在哪不清楚，

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8楼2016-11-13 13:40:07
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做该技术服务哈

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9楼2016-11-14 12:26:20
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