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921206

新虫 (初入文坛)

[求助] RT PCR对照组有结果实验组没有,疑惑 已有2人参与

求助:本人用DSS建立结肠炎小鼠模型,提取结肠组织RNA,逆转录,进行RT PCR,做了三次都是只有正常组有结果,实验组没有,疑惑不解,求指教,图1是扩增曲线,实验组均没峰值,图2是实验组的溶解曲线,均为这种波浪形

RT PCR对照组有结果实验组没有,疑惑


RT PCR对照组有结果实验组没有,疑惑-1


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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖 2016-11-10 22:07:08
xn8008: 应助指数+1 2016-11-10 22:07:14
RNA都检测了不?ACTIN有没有,最好PCR先电泳一下。

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3楼2016-11-10 21:35:41
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921206

新虫 (初入文坛)

除了模版,SYBR,引物,水都是预混好,分装的,查了文献说是DSS对PCR有影响,要对提取的RNA进行mRNA纯化,谢谢大家解答

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10楼2016-11-16 22:58:47
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921206

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by liuye1990 at 2016-11-17 19:47:14
如果你实验组和对照组的RNA是一起提出来的,多半情况是ACTIN引物有问题了

也不是引物的问题,所有体系都是预混在一起分装的,是我建造模型用的试剂DSS引起的,

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12楼2016-11-17 22:42:06
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普通回帖

921206

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖 2016-11-10 22:07:00
2楼2016-11-10 21:21:33
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921206

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mlxmiao at 2016-11-10 21:35:41
RNA都检测了不?ACTIN有没有,最好PCR先电泳一下。

RNA浓度和纯度都可以,逆转录和正常组都一样

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4楼2016-11-10 22:05:48
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

引物没有加吧?体系再检查一下。

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5楼2016-11-10 23:01:15
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gaoyunzhen

铁虫 (正式写手)

1.实验组该基因不表达;2.实验组RNA有问题或者逆转录。

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6楼2016-11-12 06:42:14
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会实验组RNA提取出问题了呀
···
7楼2016-11-12 10:58:57
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许彦

木虫 (正式写手)

体系有问题,根本就没有扩增,具体出在哪不清楚,

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8楼2016-11-13 13:40:07
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star013

新虫 (知名作家)


我们可以做该技术服务哈

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9楼2016-11-14 12:26:20
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