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xuchao7447木虫 (著名写手)
超
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[求助]
色谱柱再生 已有1人参与
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各位大神，本人实验室中有几根日本TSK G2000SWxL凝胶色谱柱，每一根都是用了一段很短的时间后出峰就越来越难看，而且回收率也不高。现在认为是柱效下降，请问各位大神这种分子排阻柱怎么再生比较好点。开始用了高浓度的硫酸盐、15%甲醇、0.1%醋酸的pH=4的磷酸盐这三种流动相冲洗，但是效果貌似并不怎么好。 |
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2楼2020-11-28 15:18:39
t892893235
木虫 (著名写手)
范德姆特大对勾
- ACI: 3
- 应助: 448 (硕士)
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- 专业: 色谱分析
【答案】应助回帖
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硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱清洗方法（7.8x30cm） 1.100%纯水以0.2mL/min的流速冲洗1.5小时. 2.如果是疏水性吸附，以20%乙腈水溶液为流动相（用0.45um的有机相滤膜过滤），采用0.2mL/min的流速冲洗1.5小时. 3.100%纯水以0.2mL/min的流速冲洗1.5小时. 4.如果是离子性物质的吸附，以0.1mol/LPB（0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4）缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相（用0.45um的水相滤膜过滤），采用0.2 mL/min的流速冲洗1.5小时后，再以0.01g/LPABA(对氨基苯甲酸)为标准品，进样量为20uL,在UV280nm下，以0.1mol/LPB（0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4）缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相检测柱效,。 5.如果是碱性物质的吸附，以0.05mol/L的磷酸二氢钠溶液（用磷酸调整pH2.5流动相（用0.45um的水相滤膜过滤），采用0.2mL/min的流速冲洗1.5小时。 6.如果上述处理后仍未能解决问题可能是氢键的吸附，在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或者0.2%-0.3%的中性界面活性剂（Triton、Tween）（用0.45um的水相滤膜过滤）后以0.2mL/min的流速冲洗1.5小时。但需要注意尿素和表面活性剂会在柱中残留。一般不建议此项操作。 7.冲洗完成后，使用0.1mol/LPB（0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4）缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相（0.45um水相滤膜过滤），0.01g/LPABA(对氨基苯甲酸)为标准品，进样量为20uL,在280nm检测柱效。 |
3楼2020-11-30 11:24:12