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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧

[交流] 电泳时上样孔滞留蛋白

最近做WB时刚电泳十几分钟时候，总是有蛋白滞留在上样孔底部，后来就压缩没有了，结果发光出来的条带（90kd）严重拖尾，哪位大神遇到过类似问题，还望不吝指教！

电泳时上样孔滞留蛋白
2016_10_25_12_35_281477370128373.jpg


电泳时上样孔滞留蛋白-1
2016_10_25_12_36_201477370180260.jpg


电泳时上样孔滞留蛋白-2
86680879.jpg
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1楼 2016-11-07 21:13:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
3楼: Originally posted by 韩晓兔 at 2016-11-08 09:11:16
蛋白上样缓冲液有没有问题啊，我上次配缓冲液的时候甘油加的少了，样品就飘的沉不下来。

蛋白上样缓冲液是买的，之前也怀疑是不是我用的那一瓶出了问题，结果换其他的缓冲液做了对比试验，都是这样的结果
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4楼2016-11-08 13:51:41
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普通回帖

田生帅菜

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:21:44
五羊齐天: 金币+1 2016-11-08 13:50:06
最后的图是WB结果吗？如果时那结果还不错。个人觉得可能是样品煮的不透，再煮沸10分钟，然后离心12000转2min，再上样试试吧！

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2楼2016-11-07 23:39:32
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韩晓兔

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:21:55
五羊齐天: 金币+1 2016-11-08 13:50:10
蛋白上样缓冲液有没有问题啊，我上次配缓冲液的时候甘油加的少了，样品就飘的沉不下来。
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3楼2016-11-08 09:11:16
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
2楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-07 23:39:32
最后的图是WB结果吗？如果时那结果还不错。个人觉得可能是样品煮的不透，再煮沸10分钟，然后离心12000转2min，再上样试试吧！

结果真心不行，做了好多次90KD的条带都是拖尾的。煮样品是在那种插孔机器里100度5min，不知道是不是那里出了问题，下次换沸水煮一下试试
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5楼2016-11-08 13:53:55
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 五羊齐天 at 2016-11-08 13:53:55
结果真心不行，做了好多次90KD的条带都是拖尾的。煮样品是在那种插孔机器里100度5min，不知道是不是那里出了问题，下次换沸水煮一下试试...

你说的那个是金属浴吧？多煮煮，你煮的时间太短了

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

五羊齐天
6楼2016-11-08 14:07:17
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
五羊齐天: 金币+1 2016-11-08 14:33:29
可能是 蛋白煮沸时间不够。有部分没完全变性

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7楼2016-11-08 14:08:46
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ylz2433

新虫 (小有名气)
★
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蛋白里的盐浓度高吗？
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努力，加油！
8楼2016-11-08 14:23:53
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
6楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-08 14:07:17
你说的那个是金属浴吧？多煮煮，你煮的时间太短了
...

好的，谢啦！
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9楼2016-11-08 14:33:20
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
8楼: Originally posted by ylz2433 at 2016-11-08 14:23:53
蛋白里的盐浓度高吗？

不知道这个，也没测过
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10楼2016-11-08 14:33:59
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