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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何研究蛋白质之间的相互作用?
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linglan2612

金虫 (正式写手)

[交流] 如何研究蛋白质之间的相互作用?

已毕业的师兄在试验中发现2个蛋白质之间有有相互作用,我想研究一下它们之间是如何相互作用的以及相互作用的位点在哪里,请教蛋白达人,该从哪方面入手呢?有没有经典的以及最新的相关文献供参考呢?谢谢,在线等.
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1楼 2008-12-01 09:58:58
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lianghust

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
linglan2612(金币+3,VIP+0):谢谢,有没有可供参考的经典文献呢?
来个动力学模拟？？
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2楼2008-12-01 10:11:27
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
★
linglan2612(金币+1,VIP+0):师兄正是通过PULL DOWN的方法证实有相互作用的,我想侧重于研究它们之间的相互作用的位点在哪里
研究两个蛋白之间的相互作用一般都要先做Pull down实验，你可以先从这方面着手，先看看一些做Pull down技术方面的文献和书籍！
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3楼2008-12-01 14:41:28
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)
做deletion 的contruct 然后做co-IP 验证是哪一段序列在interaction
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ANNA&KEVIN
4楼2008-12-03 08:02:53
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jfeng2001

看文献，看看别人怎么研究的。
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5楼2008-12-03 08:18:41
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13307600

金虫 (小有名气)
好像用酵母双杂交也可以
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6楼2008-12-03 16:38:34
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huanshi

银虫 (小有名气)
酵母双杂交（yeast two-hybrid）
*GST pull-down
*免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）
*细胞内共定位（co-localization）
*蛋白复合物的沉淀和质谱分析

以上是常用的。。。下面几个不常用。。。

*表面离子共振
    （surface plasmon resonance,Biacore）
* Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)
*蛋白质芯片
*噬菌体显示（phage display）
*ELISA  ……
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7楼2008-12-03 23:18:17
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lmj2029

金虫 (小有名气)

最常用和最简单的

★
linglan2612(金币+1,VIP+0): 6-25 10:04
还是用PULL DOWN的实验方法验证,首先针对其中一个蛋白做突变分析,分成N端,C端做PULL DOWN,确定是哪一段后,在细一点分几个结构域做PULL DOWN,找到是哪个结构域后在突变几个核心氨基酸做PULL DOWN,如果突变后没有相互作用了,就说明你找到他的作用位点了.
然后再找另一个蛋白的,方法同上.
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8楼2008-12-04 09:58:06
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bbyu007

木虫 (正式写手)
双分子荧光互补！！！！！！！！能发好文章！！！！！！！！
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我是笨笨鱼~~~
9楼2008-12-04 14:52:10
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zengfuxing

银虫 (小有名气)
spr
itc
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10楼2008-12-04 23:07:07
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