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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助酶切
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hawkinghj

新虫 (初入文坛)
marker多大？质粒多大？理论上切下来的片段多大？

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11楼2016-11-06 23:03:32
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上官凤舞

新虫 (正式写手)
双酶切的的两个酶切位点中间有多少个碱基应该是知道的吧

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12楼2016-11-06 23:30:12
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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这种情况我们也遇到过，怎么切都不对，不过可以确定的是没连上，重新做吧
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···
13楼2016-11-07 08:53:23
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笑傲江鱼

新虫 (小有名气)
我现在也做这个，我们用来双酶切的酶之间差不了十几个碱基，都是只有一个条带的。

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14楼2016-11-07 14:48:14
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)
首先你看看双酶切的两个酶切位点之间有多少碱基对，如果小于6，可能因为旁侧效应影响酶切效率，否则，如果试剂不出问题，两个位置相近的酶的单双酶切结果在胶上是看不出区别的。

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岂能尽如人意，但求无愧我心。
15楼2016-11-07 23:51:45
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韩晓兔

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
双酶切一般都切不掉几个碱基吧，那么小的片段早跑飞了，你看看质粒的酶切图谱，单酶切和双酶切切完有多长的差别，要是质粒太大切下去的片段太小的话，跑个琼脂糖电泳根本看不出差别，等你连接完构建好载体再切一下看看连进去没就行了，没必要纠结这几个碱基。
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16楼2016-11-08 09:07:46
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xucb970

金虫 (小有名气)
连接完了，再酶切验证，如果连不上回溯原因时再验证切开没有。

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宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
17楼2016-11-08 09:11:33
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liugs

禁虫 (正式写手)
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18楼2016-11-08 11:49:45
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
应该是 切开了。只是切开掉下来的片段很小，电泳的时候在最下面，跑着就没有了。可以测序验证

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19楼2016-11-08 14:38:00
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
6楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 22:12:03
但是按理说双酶切也会有两个条带，难道因为那个很短，所以就没显示？
...

你说对了就是这个样子，如果酶切下来的片段很小，而骨架很大，在图上有时候就是看不出来，也跟单酶切的大小差不多，不必纠结这个，回收后连目的片段就行，连上后酶切鉴定就行了
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20楼2016-11-08 14:40:49
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