24小时热门版块排行榜    

查看: 1955  |  回复: 26

xms0422

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助酶切 已有4人参与

最近对提的质粒进行双酶切,跑了下电泳,酶切只有一个条带,然后就分别做了单酶切,还是只有一个条带,而且双酶切和两个单酶切的条带一样大,图里,第一个是marker 第二个是质粒,第三个是双酶切,后面两个是单酶切,请问有大神知道是怎么回事吗?

求助酶切


发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xucb970

金虫 (小有名气)

连接完了,再酶切验证,如果连不上回溯原因时再验证切开没有。

发自小木虫Android客户端
宁坐板凳十年冷,不写文章半句空。
17楼2016-11-08 09:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 21:06:31
最近对提的质粒进行双酶切,跑了下电泳,酶切只有一个条带,然后就分别做了单酶切,还是只有一个条带,而且双酶切和两个单酶切的条带一样大,图里,第一个是marker 第二个是质粒,第三个是双酶切,后面两个是单酶切 ...

目的基因没连进去,重新做吧。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-11-05 21:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:59:24
你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。
...

对,所以你的意思我很有可能切成功了?

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-11-05 22:10:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 22:12:03
但是按理说双酶切也会有两个条带,难道因为那个很短,所以就没显示?
...

是的,太小可能跑出去了,也可能相对量太低,看不到。

发自小木虫Android客户端
7楼2016-11-05 22:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:29:19
目的基因没连进去,重新做吧。
...

还没到连进去的那一步,这是质粒双酶切,因为不知道切成功没,后面两个是单酶切的,但是很奇怪,双酶切和单酶切的条带一样,请问您知道是怎么回事吗?

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-11-05 21:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 21:43:16
还没到连进去的那一步,这是质粒双酶切,因为不知道切成功没,后面两个是单酶切的,但是很奇怪,双酶切和单酶切的条带一样,请问您知道是怎么回事吗?
...

你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。

发自小木虫Android客户端
4楼2016-11-05 21:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:59:24
你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。
...

但是按理说双酶切也会有两个条带,难道因为那个很短,所以就没显示?

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-11-05 22:12:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:59:24
你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。
...

但也有可能是单酶切,好纠结,但是后面那两个应该能说明,如果单酶切的话,是成功的。

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-11-05 22:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 22:15:29
但也有可能是单酶切,好纠结,但是后面那两个应该能说明,如果单酶切的话,是成功的。
...

不明白你为什么要纠结这个?双酶切回收以后连目的基因不就完了吗?有纠结的这点功夫载体都构建好了。

发自小木虫Android客户端
9楼2016-11-05 22:20:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 22:20:03
不明白你为什么要纠结这个?双酶切回收以后连目的基因不就完了吗?有纠结的这点功夫载体都构建好了。
...

这想一步一步踏实走,因为之前没做过这个方向的,所以有点小心翼翼

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-11-05 22:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xms0422 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:33 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神:2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀? +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
请填处理意见