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xms0422

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助酶切 已有4人参与

最近对提的质粒进行双酶切,跑了下电泳,酶切只有一个条带,然后就分别做了单酶切,还是只有一个条带,而且双酶切和两个单酶切的条带一样大,图里,第一个是marker 第二个是质粒,第三个是双酶切,后面两个是单酶切,请问有大神知道是怎么回事吗?

求助酶切


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xucb970

金虫 (小有名气)

连接完了,再酶切验证,如果连不上回溯原因时再验证切开没有。

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宁坐板凳十年冷,不写文章半句空。
17楼2016-11-08 09:11:33
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ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 21:06:31
最近对提的质粒进行双酶切,跑了下电泳,酶切只有一个条带,然后就分别做了单酶切,还是只有一个条带,而且双酶切和两个单酶切的条带一样大,图里,第一个是marker 第二个是质粒,第三个是双酶切,后面两个是单酶切 ...

目的基因没连进去,重新做吧。

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2楼2016-11-05 21:29:19
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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:59:24
你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。
...

对,所以你的意思我很有可能切成功了?

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5楼2016-11-05 22:10:26
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ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 22:12:03
但是按理说双酶切也会有两个条带,难道因为那个很短,所以就没显示?
...

是的,太小可能跑出去了,也可能相对量太低,看不到。

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7楼2016-11-05 22:14:43
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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:29:19
目的基因没连进去,重新做吧。
...

还没到连进去的那一步,这是质粒双酶切,因为不知道切成功没,后面两个是单酶切的,但是很奇怪,双酶切和单酶切的条带一样,请问您知道是怎么回事吗?

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3楼2016-11-05 21:43:16
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ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 21:43:16
还没到连进去的那一步,这是质粒双酶切,因为不知道切成功没,后面两个是单酶切的,但是很奇怪,双酶切和单酶切的条带一样,请问您知道是怎么回事吗?
...

你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。

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4楼2016-11-05 21:59:24
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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:59:24
你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。
...

但是按理说双酶切也会有两个条带,难道因为那个很短,所以就没显示?

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6楼2016-11-05 22:12:03
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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 21:59:24
你自己看看质粒的多克隆位点,双酶切也没切掉几个碱基,所以从电泳上看和单酶切在一个位置。
...

但也有可能是单酶切,好纠结,但是后面那两个应该能说明,如果单酶切的话,是成功的。

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8楼2016-11-05 22:15:29
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ztt2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-05 22:15:29
但也有可能是单酶切,好纠结,但是后面那两个应该能说明,如果单酶切的话,是成功的。
...

不明白你为什么要纠结这个?双酶切回收以后连目的基因不就完了吗?有纠结的这点功夫载体都构建好了。

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9楼2016-11-05 22:20:03
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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-05 22:20:03
不明白你为什么要纠结这个?双酶切回收以后连目的基因不就完了吗?有纠结的这点功夫载体都构建好了。
...

这想一步一步踏实走,因为之前没做过这个方向的,所以有点小心翼翼

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10楼2016-11-05 22:41:17
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