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蛋白纯化小白，请教硫酸铵沉淀纯化及tris问题！ 已有3人参与
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看了很多同学用硫酸铵沉淀纯化蛋白。 我尝试做预实验，梯度沉淀蛋白，在4度沉淀30分钟，透析搅拌透析1小时，透析袋1kDa，我知道不对，时间太短了，但是预实验就这么尝试一下，结果就是盐没除掉。 这里面有几个问题，1沉淀蛋白时间参考文献就可以吧，没必要透析过夜是嘛？2透析袋分子量会不会太小？换一个3千的能好一点对嘛？3一般透析要过夜才能除干净硫酸铵嘛？4看有同学用缓冲盐溶液tris.HCI透析，是不是就是为了控制ph呢？5纯化的蛋白一般用tris缓冲盐溶解，为什么要选择tris呢？最后跑电泳不用去除么？ 各位高手们指点一下嘛，因为是最基本的问题，做不好也没办法开展下面的实验。本人是做制剂的，实验室也没有做蛋白的，所以自己撞头比较严重，跪谢大家的指导。感激不尽 发自小木虫IOS客户端 |
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zhangyang343
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2楼2016-11-05 15:31:38