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丫丫2016银虫 (正式写手)
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[求助]
基因组甲基化（MSAP）的选扩问题
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MSAP，现在做了一轮预扩增了，要进行选择性扩增了，但是要合成那些选择性扩增的引物呢？两种酶（EcoR I 和HpaII /MspI）的选择性扩增引物该怎么筛选？ 我的两段预扩增引物分别是： EcoR I 引物：GACTGCGTACCAATTC； HpaII /MspI引物：ATCATGAGTCCTGCTCGG。 那么，有以下几个问题： 1、EcoR I 的选择性引物 是不是在预扩引物后面直接加两个碱基就行了？ 这两个碱基的组合方式有16种，是不是每一种都要尝试，然后根据后面的聚丙烯酰胺凝胶电泳来筛选比较好的？（一般是在预扩引物后面加几个碱基呢？看文献看不懂，都看晕了。。） 2、HpaII /MspI 的选择性引物一般是在HpaII /MspI 预扩增引物后面加3个还是4个碱基呢？？？（或者加2个碱基也行？？）是不是也是每一种都要去尝试？ 谢谢大家的关注~！！！期待你的帮助！！！@biostar2009@wizardfan@youlinglyw@飞约疯人院 |
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2楼2018-07-10 16:59:08