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求大神帮忙！如何诱导出可溶性蛋白？包涵体变性纯化后如何复性？ 已有1人参与
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| 本人用的是PET32a原核表达载体，用IPTG诱导。前期做的预试验是分别设置了37°和28°两种条件。分别诱导2小时，4小时，6小时，8小时，并且IPTG浓度也设置了梯度 0.2M,0.4M,0.6M,0.8M.当时做的时候，并无可溶性蛋白诱导出来，而后认为形成了包涵体。就进行了包涵体的变性纯化。但我需要的是活性蛋白来进行下一步的试验，当时没有考虑到。。。好尴尬啊~现在不知道应该如何进行复性？。。。求赐教。。。同时，看到有文章写到这个蛋白诱导出了可溶性蛋白，我想知道要如何诱导出来？因为跟前人做的完全一致，除了前人用的超声波破碎，我直接买的试剂Bugbust进行破碎。。。求大神解答。。。已经写的很详细了 |
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 虫友问答-分子生物 |
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2楼2016-11-04 09:40:48
yuzaiyutian
铁虫 (小有名气)
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- 专业: 细胞生物学
3楼2016-11-06 09:45:07
4楼2016-11-06 10:13:12
田生帅菜
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- 性别: GG
- 专业: 病毒学
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原核表达是很麻烦的实验。在你的陈述中，有一点很重要但你没有说清楚。你说认为形成了包涵体。这个需要证明，不能认为。你可以试试不同的载体和标签，或者你在先有条件进行载体改造。GST，sumo利于可溶性表达。当然你也可以用Fc进行真核表达，活性肯定更好。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2016-11-06 22:25:46
