| 查看: 1764 | 回复: 4 | |||
[求助]
求大神帮忙！如何诱导出可溶性蛋白？包涵体变性纯化后如何复性？ 已有1人参与
|
| 本人用的是PET32a原核表达载体，用IPTG诱导。前期做的预试验是分别设置了37°和28°两种条件。分别诱导2小时，4小时，6小时，8小时，并且IPTG浓度也设置了梯度 0.2M,0.4M,0.6M,0.8M.当时做的时候，并无可溶性蛋白诱导出来，而后认为形成了包涵体。就进行了包涵体的变性纯化。但我需要的是活性蛋白来进行下一步的试验，当时没有考虑到。。。好尴尬啊~现在不知道应该如何进行复性？。。。求赐教。。。同时，看到有文章写到这个蛋白诱导出了可溶性蛋白，我想知道要如何诱导出来？因为跟前人做的完全一致，除了前人用的超声波破碎，我直接买的试剂Bugbust进行破碎。。。求大神解答。。。已经写的很详细了 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 虫友问答-分子生物 |
» 猜你喜欢
中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培
已经有4人回复
-
调剂推荐
已经有4人回复
-
总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂
已经有5人回复
-
0703化学338求调剂！
已经有3人回复
-
284求调剂
已经有7人回复
-
271求调剂
已经有6人回复
-
312求调剂
已经有9人回复
-
352求调剂
已经有4人回复
-
085602化学工程求调剂。
已经有3人回复
-
085600材料与化工306
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
 |
2楼2016-11-04 09:40:48
yuzaiyutian
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 333.7
- 散金: 15
- 帖子: 117
- 在线: 23.9小时
- 虫号: 3375326
- 注册: 2014-08-20
- 性别: GG
- 专业: 细胞生物学
3楼2016-11-06 09:45:07
4楼2016-11-06 10:13:12
田生帅菜
新虫 (正式写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1765.1
- 散金: 369
- 红花: 11
- 帖子: 390
- 在线: 55.2小时
- 虫号: 5199485
- 注册: 2016-11-04
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
|
原核表达是很麻烦的实验。在你的陈述中，有一点很重要但你没有说清楚。你说认为形成了包涵体。这个需要证明，不能认为。你可以试试不同的载体和标签，或者你在先有条件进行载体改造。GST，sumo利于可溶性表达。当然你也可以用Fc进行真核表达，活性肯定更好。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2016-11-06 22:25:46
